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急性髓系白血病NPM1基因突变检测方法的研究
本研究旨在建立检测急性髓系细胞白血病(AML)患者NPM1基因突变的方法.针对NPM1基因突变集中区域设计引物/探针,建立高分辨熔解曲线方法(HRM)和等位基因特异PCR方法(AS-PCR),通过89份AML标本进行了临床评估,并来用毛细管电泳法(CE)和测序法作为对照进行了验证.结果表明,通过上述4种方法共检出阳性标本17例(19.1%),其中A型突变15例,B型和Nm型突变各1例.上述方法中HRM法检测全面,灵敏度为5%,而AS-PCR法有一定的漏检,但灵敏度高达0.01%.结论:考虑到操作的难易程度,同时也结合临床样品的检测情况,HRM在临床上可法用于NPM1突变筛查,而AS-PCR法可用于后续的微小残留病定量检测.
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MS-HRM检测结直肠癌患者外周血AKAP12基因及其临床意义
目的 探讨MS-HRM法定量检测结直肠癌患者外周血中AKAP12基因甲基化程度及其临床意义.方法 采用MS-HRM法定量检测80例结直肠癌患者和20名健康人外周血中AKAP12基因的甲基化水平,并分析评价其与病理分期分级的关系.同时对MS-HRM法的重复性和与传统MSP法检测的灵敏度和检出率进行比较.结果 MS-HRM法从80例结直肠癌患者中检测到38例(47.5%)AKAP12基因启动子区域不同程度的甲基化患者(甲基化1%～20%的24例,20%～60%的12例,60%～100%的2例),20名健康人中仅检测到甲基化<10%的2名.MS-HRM法检测AKAP12基因甲基化的灵敏度(1%)优于传统的MSP法(10%).AKAP12基因甲基化水平与结直肠癌患者的年龄、性别的差异无统计学意义(x2分别为3.13、1.70,P均>0.05),但与结直肠癌的Dukes分期和分化程度的差异均有统计学意义(x2分别为5.93、8.41,P均=0.01).结论 外周血MS-HRM定量检测AKAP12基因甲基化程度的方法比传统MSP法灵敏度更高,AKAP12基因甲基化有望成为结直肠癌进展评估的分子指标.
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Janus激酶246/1单倍型与中国上海地区汉族PV和ET患者的相关性
目的 研究中国汉族人群中JAK2 46/1单倍型的tSNP rs12343867基因型与PV和ET患病易感性以及与JAK2 V617F突变的关系.方法 收集125例PV患者和87例ET患者及213名健康人全血DNA,用PCR结合高分辨熔解曲线法检测JAK2 rs12343867位点的基因型,并用简单随机抽样法从425份经熔解曲线法分析的标本中选取20份标本进行基因测序验证,x2分析PV和ET患者JAK2 46/1单倍型与MPNs患病风险的关系.结果 125例PV患者中C等位基因占62.8%,T等位基因占37.2%;87例ET患者C等位基因占45.4%,T等位基因占54.6%.20例随机选取的标本经基因测序法验证与高分辨熔解曲线法分析结果一致.JAK2 rs12343867 3种基因型分布差异有统计学意义(x2=78.69,P＜0.01).CC和CT基因型携带者均较TT型携带者发生MPNs的风险显著增加[比值比(OR)分别为18.56、3.60,95%可信限(CI)分别为8.70～39.58、2.28～5.69,P均＜0.01).PV组的等位基因频率在V617F阳性与阴性组之间的分布差异无统计学意义(x2=2.47,P=0.12);而在ET组中V617F阳性患者的等位基因C的检出率与V617F阴性组之间的分布差异有统计学意义(x2=7.75,P＜0.01).结论 JAK2 46/1单倍型是中国汉族PV和ET患者的易感基因.在ET患者中,个体携带的JAK2 46/1单倍型与后天获得JAK2 V617F突变相关.
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MS-HRM技术定量检测喉鳞癌Syk(L)基因启动子甲基化的方法及意义
目的 利用MS-HRM技术建立Syk(L)基因启动子甲基化定量检测的方法,并探讨其甲基化程度与喉鳞癌临床病理参数的相关性.方法 提取48份喉鳞癌组织及20份癌旁正常喉黏膜组织DNA并进行甲基化修饰.用MS-HRM技术定量检测Syk(L)基因启动子甲基化水平,并分析评价其与喉鳞癌临床病理参数的相关性.结果 MS-HRM检测Syk(L)基因启动子甲基化结果为20份癌旁正常喉黏膜组织均位于0％区域;喉鳞癌组织中6份位于0％区域,8份位于0％ ～ 30％区域,20份位于30％～70％区域,14份位于70％～100％区域.Syk(L)基因启动子甲基化水平与喉鳞癌临床分型差异无统计学意义(P＞0.05),但与临床T分期、病理组织学分级、颈淋巴结转移差异有统计学意义(P＜0.05),且Syk(L)甲基化水平随临床T分期及病理组织学分级增高而增高.结论 MS-HRM定量检测Syk(L)基因启动子甲基化有望成为喉鳞癌进展评估分子指标检测的有效手段.
