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氨肽酶抑制剂对全反式维甲酸诱导人急性早幼粒白血病细胞株NB4细胞分化作用的影响及其机制的初步探讨
为了研究氨肽酶抑制剂乌苯美司(bestatin)对全反式维甲酸(ATRA)诱导人APL细胞株NB4细胞分化作用的影响及其可能机制,NB4细胞经bestatin和ATRA单用或联合应用处理一定时间后,用光学显微镜观察细胞形态,流式细胞仪检测CD11b表达,四氮唑蓝(NBT)还原实验检测分化细胞功能,RT-PCR法检测c-myc和c-EBPεmRNA表达,Western blot检测c-Myc蛋白表达.结果显示:NB4细胞经100μg/ml bestatin和10 nmol/L ATRA联合处理72小时后,其分化的形态更明显;100μg/ml bestatin与不同浓度ATRA联合处理72小时,能增强NB4细胞的NBT还原能力,与单用相应浓度ATRA组相比,差异显著(P＜0.01);从48-96小时,100μg/ml bestatin能增强10 nmol/L ATRA诱导NB4细胞的NBT还原能力,且呈时间依赖性,与相应时间点ATRA组相比,差异明显(P＜0.01);与单用10 nmol/L ATRA组相比,ATRA(10 mmol/L)和bestatin(100μg/ml)联用处理72小时,NB4细胞CD11b阳性表达率明显增加(P＜0.01);与单用10 nmol/L ATRA组相比,联用100μg/ml bestatin处理4小时后,NB4细胞c-myc mRNA表达的降低更明显(P＜0.05);50、75、100μg/ml bestatin与10 nmol/L ATRA联合处理8小时后,NB4细胞c-Myc蛋白表达水平明显降低,与单用ATRA组相比差异显著(P＜0.05);药物联用各组NB4细胞c-Myc蛋白表达水平与NBT还原能力之间呈负相关(r=-0.940,p=0.017);与100μg/ml bestatin联用不能增强10 nmol/L ATRA上调c-EBPεmRNA的表达;50、75、100μg/ml bestatin单独处理对NB4细胞的分化无影响.结论:氨肽酶抑制剂bestatin能够增强ATRA对NB4细胞的诱导分化作用,这可能与bestatin协同ATRA下调c-myc的表达有关.
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一种利用荧光标记检测氨肽酶N抑制剂与肿瘤细胞结合的方法
目的:建立利用荧光标记法检测氨肽酶抑制剂和肿瘤细胞结合的方法.方法:以异硫氰酸荧光素(FITC)标记氨肽酶N抑制剂LYRM03和Bestatin,制备荧光探针FITC-LYRM03、FITC-Bestatin,应用荧光显微成像观察和流式细胞仪检测标记化合物FITC-LYRM03、FITC-Bestatin对肿瘤细胞的结合与氨肽酶N抑制活性的相关性.结果:化合物LYRM03和Bestatin具有肿瘤细胞的氨肽酶N抑制活性,荧光标记化合物FITC-LYRM03、FITC-Bestatin能与肿瘤细胞有不同程度的结合.结论:标记化合物FITC-LYRM03、FITC-Bestatin和肿瘤细胞的结合与对肿瘤细胞的氨肽酶N抑制活性相一致.
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Bestatin下调卵巢癌患者外周血Treg细胞的免疫抑制作用
目的 探讨氨肽酶N抑制剂Bestatin对肿瘤患者外周血CD4+CD25+Treg的生物学效应及机理.方法 将Bestatin 加入PHA刺激新鲜分离的卵巢癌患者外周血Treg细胞的体外培养体系,采用流式细胞术分析Foxp3和CTLA-4的表达.进而分析Bestatin对Treg细胞抑制CD4+CD25T细胞活化增殖的影响.结果 Bestatin可抑制Treg细胞表达Foxp3和CTLA-4,并促进Treg细胞和CD4+CD25T细胞的体外共培养体系中T细胞的增殖.结论 抑制氨肽酶N可下调Treg细胞的免疫抑制作用,对肿瘤治疗具有潜在应用价值.
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氨肽酶抑制剂——Bestatin诱导人白血病细胞凋亡的研究
目的：研究国产氨肽酶N抑制剂bestatin对人白血病细胞的作用及其机理。方法：应用MTT比色法观察bestatin对细胞的生长抑制作用，流式细胞仪检测细胞表面CD13的表达；光学显微镜观察细胞形态结构的改变；DNA凝胶电泳、DNA片段原位末端标记及流式细胞仪(FCM)检测，以分析细胞凋亡；Rhodamin(Rh)123染色后，FCM检测细胞线粒体跨膜电位。结果：(1)Bestatin明显抑制HL60细胞的生长，半数抑制(IC50)约为13.03μg/ml，而K562细胞的敏感性较差，IC50大于400μg/ml，其抑制作用均呈剂量-时间效应关系；(2)典型的细胞形态改变，DNA片段化，DNA末端原位标记的检出及FCM结果，均证实bestatin能诱导白血病细胞的凋亡；(3)10μg/ml bestatin作用24h即可明显诱导HL60细胞凋亡，K562细胞的凋亡敏感性显著低于HL60细胞，两者凋亡率均呈剂量和时间依赖性；(4)经bestatin作用后，细胞出现G1期阻滞；(5)经bestatin处理的HL60细胞出现线粒体跨膜电位(△Ψm)下降。结论：Bestatin能抑制K562、HL60细胞生长，诱导凋亡是其机制之一，该效应可能与线粒体△Ψm下降有关。
