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TRAIL对人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226黏附和凋亡的影响及其作用机制的初步探讨
本研究探讨肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体TRAIL对人多发性骨髓瘤细胞系RMPI8226的生长抑制作用,对细胞黏附和凋亡的影响及其作用机制.用MTT法检测TRALL对RPMI8226黏附功能和生长的影响:用An nexin Ⅴ/PI检测细胞凋亡;流式细胞学检测细胞表面黏附分子的表达;RT-PCR法测定凋亡相关基因表达水平和Western blot法检测凋亡相关蛋白表达.结果表明:TRAIL抑制RPMI8226细胞生长;可诱导RPMI8226细胞凋亡,并伴有抗凋亡基因Mcl-1、XIAP、cFLIP、CARP1、CARP2和Bcl-2 mRNA表达水平下降,促凋亡基因Bax mRNA表达水平升高;RPMI8226细胞内的凋亡执行蛋白caspase-3和NF-κB P65(RelA)表达水平随TRAIL浓度的增加而下降.此外,TRAIL明显上调了RPMI8226细胞表面黏附分子CXCR4的表达.结论TRAIL上调人多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226细胞表面的黏附分子CXCR4表达水平.TRAIL可诱导人多发性骨髓瘤细胞株RPMl8226凋亡.在一定的浓度范围内,TRAIL对人骨髓瘤细胞株RPMI8226的生长抑制呈时间-剂量依赖性.
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SiRNA沉默Annexin Ⅱ对骨髓瘤RPMI8226细胞增殖影响
目的 观察沉默Annexin Ⅱ(A2)基因对骨髓瘤RPMI8226细胞增殖影响.方法 采用A2siRNA转染人骨髓瘤RPMI8226细胞后应用real-time PCR和流式细胞术鉴定干扰效果.MTT法检测A2siRNA对细胞增殖的作用.结果 A2siRNA组较阴性对照组细胞生长抑制率在24h、48h、72h分别为16.87%±3.97%,34.92%±4.15%,39.62%±5.67% vs-8.93%±9.67%,-5.98%±2.56%,3.85%±5.48%(P＜0.05),A2siRNA可对RPMI8226细胞增殖起抑制作用.结论 SiRNA沉默A2基因可抑制骨髓瘤RPMI8226细胞增殖.
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华蟾素诱导多发性骨髓瘤细胞RPMI8226凋亡的实验研究
目的:观察华蟾素对多发性骨髓瘤细胞(MM) RPMI8226抑制增殖和凋亡作用.方法:应用MTT法,检测华蟾素对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖的影响.通过Hochest33258染色、流式细胞仪检测细胞凋亡.结果:华蟾素明显抑制RPM18226细胞的增殖,与空白对照组相比,差别有统计学意义(P＜0.05).华蟾素作用RPM18226细胞增殖24h的半数抑制浓度(IC50)分别为0.152μg/ml.华蟾素以0.15μg/ml及0.3μg/ml作用于RPM18226 24h后细胞形态改变,可见明显的凋亡小体出现.Annexin V-PI双标记法流式细胞仪分析结果显示,RPMI8226细胞0.3μg/ml华蟾素作用6、12、24h后,早期凋亡细胞百分数分别为7.23％、12.16％、28.04％,明显高于空白对照组4.78％.结论:华蟾素对MM细胞株RPMI8226有生长抑制作用,可能是通过诱导其发生凋亡而起作用.
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尿多酸肽抑制多发性骨髓瘤细胞株RPIMI 8226增殖及其机制研究
目的 探讨尿多酸肽(CDA-2)抑制多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226增殖作用及其机制.方法 采用四甲基偶氮唑(MTT)比色法检测CDA-2对RPMI8226抑制作用并筛选研究浓度;通过Hoechst33258、Annexin-V/PI、细胞周期分析、DNA琼脂糖凝胶电泳等方法检测CDA-2诱导RPMI8226凋亡作用;使用Western Blot法检测caspase-8、caspase-3及其激活物的表达改变;半定量RT-PCR法检测TNF、FADD、TRAF3 mRNA表达.结果 CDA-2能够抑制RPMI8226细胞株增殖,并呈浓度依赖性,IC50为1.64 mg·mL-1;经CDA-2作用后,Hoechst33258荧光染色提示细胞核浓集及出现凋亡小体,Annexin-V/PI分析示早期凋亡细胞比例呈时间依赖增加,细胞周期分析提示呈浓度依赖上调凋亡峰及下调G1期比例,DNA凝胶电泳可见断裂成180～200 bp及其倍数的片断梯形条带,故CDA-2可诱导RPMI8226细胞株凋亡;Western Blot检测发现随药物作用时间延长caspase-8、caspase-3表达明显下降,而active-caspase8、active-caspase3表达上升;半定量RT-PCR证实凋亡相关基因TNF、FADD、TRAF3 mRNA表达上调.结论 CDA-2可抑制RPMI8226增殖,且可通过死亡受体途径诱导细胞凋亡.
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慢病毒载体介导SPROUTY2基因过表达对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖作用的影响
目的 探讨慢病毒表达载体介导的人SPROUTY2基因过表达对多发性骨髓瘤RPMI8226细胞增殖、克隆性生长和细胞外调节蛋白激酶(ERK)抑制剂敏感性等生物学特性的影响.方法 克隆人SPROUTY2基因,构建SPROUTY2基因与绿色荧光蛋白(GFP)的重组慢病毒表达载体LV-S-GFP及对照载体LV-GFP.脂质体法包装病毒;优化慢病毒感染RPMI8226细胞的条件;荧光显微镜观察GFP表达;反转录聚合酶链反应(PCR)、蛋白质印迹法(Western blot)方法分别检测目的基因及其蛋白的表达,CCK-8法检测RPMI8226细胞增殖及其对ERK 1 /2抑制剂AS703026敏感性的影响,软琼脂克隆形成实验检测细胞的克隆性生长能力.结果 成功地构建了共表达SPROUTY2基因和报告GFP的高滴度慢病毒颗粒.LV-S-GFP实验组RPMI8226细胞中SPROUTY2的表达明显高于LV-GFP对照组,灰度值分别为(230.85±32.12)％和(140.35±36.62)％(P＜ 0.05).过表达SPROUTY2基因对骨髓瘤细胞增殖具有抑制作用,并可以增强ERK1/2抑制剂AS703026对RPMI8226细胞的杀伤作用.过表达SPROUTY2基因可明显抑制RPMI8226细胞的克隆性生长.结论 慢病毒载体系统可高效介导SPROUTY2基因在RPMI8226细胞中的表达,抑制骨髓瘤细胞增殖及克隆性生长,并能够提高其对ERK抑制剂的敏感性.
