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实验性变态反应性神经炎中整合素α6β4的表达及意义
目的研究实验性变态反应性神经炎(EAN)中整合素α6β4的mRNA表达变化,探讨α6β4与许旺细胞功能状态的关系,以及其表达变化与髓鞘损伤和修复过程的关系.方法建立Lewis大鼠EAN动物模型,取18只模型鼠坐骨神经,用原位杂交和半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测模型的不同时期Lewis大鼠神经局部的整合素α6β4表达,以正常鼠(3只)为空白对照.结果原位杂交结果表明在EAN的发病过程中,α6的表达未见明显变化,而β4的表达在急性期明显减弱,恢复期或后期逐渐恢复.β4表达减弱主要体现为阳性信号的稀疏而不反映为单个信号的量的变化.以GAPDH为内参照,对整合素α6β4的mRNA水平做半定量分析,结果显示:EAN病变过程中,α6的mRNA表达变化不明显,而β4的mRNA呈现早期减少后期逐渐恢复进而高于正常的变化过程.结论炎症因素造成了许旺细胞变性损伤,影响其整合素的表达,许旺细胞出现了与胚胎发育过程类似的表型转换.从这个意义上,可以把α6β4看作许旺细胞分化状态的一个标志,至少可以看作是标志EAN病变过程的一个重要分子.α6β4表达变化与髓鞘的损伤和修复过程密切相关.
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实验性自身免疫性神经炎相关细胞的免疫机制
目的 建立P2或PO多肽诱导的实验性自身免疫性神经炎(EAN)大鼠模型,确定诱导EAN的优选抗原和剂量,探讨EAN相关细胞免疫机制.方法 实验组用P257-81或P0180-199多肽加完全弗氏佐剂(FCA)免疫Lewis大鼠,对照组单用FCA免疫,致敏后每日对大鼠进行临床评分,比较高峰期大评分,致敏第14天进行淋巴细胞增殖试验,测定CD4+T/淋巴结单个核细胞(MNC)和CD4+CD25+T/CD4+T细胞百分比,并进行坐骨神经病理检查.结果 实验大鼠瘫痪高峰期大评分,P257-81 200μg组显著高于P257-81 100μg组和P0180-199 200μg组(均P＜0.01),P257-81 100μg组与P0180-199200μg组差异无统计学意义;P257-81 100μg组和P257-81 200μg组对P257-81多肽刺激反应性显著高于对照组(均P＜0.01),P0180-199 200μg组对P0180-199多肽刺激反应性显著高于对照组(P＜0.01),P257-81 100μg组和P0180-199200μg组对相应致敏多肽刺激反应性显著低于P257-81200μg组(均P＜0.05);CD4+T/淋巴结MNC百分比在各组间差异无统计学意义;CD4+CD25+T/CD4+T细胞百分比,P257-81200μg组显著低于P257-81 100μg组、P0180-199200μg组和对照组(均P＜0.01),P257-81 100μg组和P0180-199 200μg组显著低于对照组(均P＜0.01),P0180-199200μg组显著低于P257-81 100μg组(P＜0.01);EAN急性期坐骨神经以炎性细胞浸润为主,P257-81 200μg组重于其他实验组(均P＜0.01),P257-81200μg组慢性期无炎性细胞浸润,而表现多发性局灶性脱髓鞘和神经纤维崩解未恢复.结论 200μgP257-81多肽是诱导EAN的优选抗原,EAN致病与CD4+ T细胞数量无关,而与致病性T细胞活性增强及CD4+CD25+T细胞减少有关.
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Th1/Th2型细胞因子在实验性自身免疫性神经炎发病机制中的作用
目的 建立P2多肽诱导的实验性自身免疫性神经炎(EAN)大鼠模型,探讨Th1/Th2型细胞因子在EAN发病机制中的作用.方法 实验组用100 μg或200 μg P257-81多肽加完全弗氏佐剂(FCA)免疫Lewis大鼠,对照组单用FCA免疫,致敏后每日对大鼠进行临床评分,比较高峰期高评分.致敏第14天测定淋巴结细胞培养液上清干扰素(IFN)-γ、IL-4及IL-10的含量,并进行坐骨神经病理学检查.结果 实验大鼠瘫痪高峰期高评分P257-81 200 μg组(3.6±0.3)显著高于100 μg组(2.2±0.6,P＜0.01);P257-81 200 μg组大鼠病程显著长于100 μg组;IFN-γ含量,两组实验大鼠均显著高于对照组[分别为(530.6±91.7)、(806.3±132.4)和(35.0±5.9)pg/ml,均P＜0.01],而P257-81 200 μg组显著高于100 μg组(P＜0.01);IL-4和IL-10含量,P257-81 100 μg组均显著高于对照组(均P＜0.01),P257-81 200 μg组显著低于对照组(P＜0.05,P＜0.01);坐骨神经病理可见EAN急性期以炎性细胞浸润为主,P257-81 200 μg组慢性期无炎性细胞浸润,而表现为多发性局灶性脱髓鞘和神经纤维崩解未恢复.结论 EAN临床表现随致敏原P257-81多肽剂量增加而加重;在EAN急性期,IFN-γ水平与EAN临床表现大致平行;EAN疾病具有自限性可能与IL-4和IL-10水平增高有关,而疾病迁延可能与IL-4和IL-10水平降低有关.
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整合素α6β4和实验性变态反应性神经炎
目的:研究整合素α6和β4在实验性变态反应性神经炎(experimental allergic neuritis,EAN)中的表达变化,探讨其表达变化与病变过程中髓鞘损伤和修复的关系.方法:建立Lewis大鼠EAN动物模型,分别在急性期和恢复期的模型鼠坐骨神经,用免疫组化的方法观察α6、β4及层黏连蛋白的蛋白表达状况;用原位杂交的方法检测α6β4的mRNA的表达状况.结果:免疫组化结果表明,β4在急性期表达减少(P<0.05),恢复期表达无明显变化(P=0.6840). α6和层黏连蛋白在病变急性期和恢复期与对照组比较变化均不明显(α6 P=0.0751,层黏连蛋白P=0.2047),原位杂交也得出相似结论(急性期β4 P<0.05,恢复期β4 P=0.823;α6 P= 0.81).结论:炎症损伤影响了施万细胞(Schwann cell,SC)整合素的表达,其表达模式与周围神经的胚胎发育过程中α6,β1及β4的表达变化相似,推测β4与髓鞘再形成的关系更加密切.α6和β4表达变化与髓鞘的损伤和修复过程密切相关.
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实验性变态反应性脑脊髓炎大鼠室周器官的形态学观察
室周器官(circumventricular organs,CVOs)是位于第3、4脑室壁上缺乏血脑屏障的8个微小器官,包括终板血管器、穹隆下器、正中隆起、连合下器、后区、垂体后叶、漏斗柄和松果体隐窝.脉络丛也是相对缺乏血脑屏障的器官,不少人推测,CVOs缺乏血脑屏障,可能是血携免疫信息分子入脑的位点.1993年,朱长庚提出"脑-脑脊液神经体液回路"的概念,他认为脑脊液途径是"免疫-神经-内分泌网络"的重要联系途径.那么均接触脑脊液的CVOs是否也参与免疫信息的转导呢?我室以往研究发现,改变大鼠全身免疫状态,CVOs形态发生调变.本研究在脑内免疫状态改变情况下,即大鼠实验性变态反应性脑脊髓炎(experiment allergic encephalomyelitis, EAE)的不同时程(潜伏期、发病期、恢复期和恢复后期),观察CVOs的结构变化.
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EAN大鼠周围神经病理、电生理变化及TNF-α免疫表达
目的 观察实验性自身免疫性神经炎(EAN)大鼠周围神经病理、电生理和血清TNF-α及其受体P55表达变化.方法 45只SD大鼠,随机分为三组:对照组、模型1组、模型2组,EAN大鼠造模采用SP26一次性腹腔注射法诱导,分别于诱导造模成功后第14天(模型1组)及第28天(模型2组)电镜观察尾神经雪旺细胞变化,肌电图诱发电位仪检测运动神经传导速度(MCV)、感觉神经传导速度(SCV),放射免疫法检测血清TNF-α及P55的表达.结果 模型1组及模型2组MCV、SCV低于对照组,模型2组MCV、SCV高于模型1组;模型1组及模型2组TNF-α、P55表达水平高于对照组,模型2组TNF-α表达水平高于模型1组;模型1组电镜下可见尾神经脱髓鞘,雪旺细胞变性坏死,模型2组神经细胞形态较模型1组部分恢复,可见凋亡雪旺细胞.结论 EAN大鼠存在周围神经脱髓鞘等急性免疫反应损伤;细胞凋亡可能是EAN神经细胞损伤的主要形式;TNF-α在EAN发病中具有重要作用.
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Th17相关细胞因子在实验性变态反应性神经炎中的作用
目的 观察T辅助细胞17(Th17)相关细胞因子白细胞介素17(IL-17)和白细胞介素23(IL-23)在实验性自身免疫性神经炎(EAN)模型中的表达,探讨Th17细胞在EAN的作用.方法 用牛周围神经鞘磷脂(BPM)免疫Lewis大鼠,观察免疫后9、15、21 d大鼠的临床表现和坐骨神经中IL-17、IL-23蛋白及mRNA的表达.结果 免疫后9dEAN大鼠开始出现l临床症状,15 d到达疾病高峰.IL-17蛋白及mRNA在免疫后第15天表达均达到高点,以后逐渐下降,且各组与对照组相比差异显著(P<0.05).IL-23蛋白及mRNA在免疫后9 d表达多,随后逐渐下降,9、15 d与对照组相比差异显著(P<0.05).结论 IL-17可能与EAN的疾病进程有关,IL-23可能在EAN疾病诱导阶段起一定作用.
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脱氢表雄酮对大鼠实验性自身免疫性神经炎的影响
目的 探讨脱氢表雄酮(DHEA)对大鼠实验性自身免疫性神经炎(EAN)发病的影响及其机制.方法 随机将36只Lewis大鼠分为DHEA 0.5mg治疗组、2mg治疗组和对照组.治疗组于注射牛周围神经髓磷脂(BPM)抗原乳剂后第5天开始每日皮下注射DHEA,对照组皮下注射相同体积的DHEA溶媒.观察各组发病时间及临床评分,检查疾病高峰期坐骨神经组织病理及干扰素-γ(IFN-γ)、肿瘤坏死因子-a(TNF-a)阳性反应细胞,检测引流淋巴结和脾脏单个核细胞增殖反应,检测培养上清TNF-a、IFN-γ、白介素-10(IL-10)含量.结果 两种剂量DHEA治疗组均能延迟EAN发病时间(P均<0.05),减少坐骨神经炎性细胞浸润数目(P均<0.05)和IFN-γ、TNF-a阳性反应细胞数目(P均<0.05),抑制BPM刺激T淋巴细胞增殖(P均<0.05),降低培养上清中IFN-γ、TNF-a水平(P均<0.05).2mg治疗组疾病高峰期临床评分明显降低于对照组(P<0.05).各组间IL-10水平未显示明显差异(P>0.05).结论 DHEA可能通过抑制自身反应性T淋巴细胞增殖和促炎性细胞因子过度表达减轻EAN病情,2mg治疗组具有更明显的免疫治疗效果.
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实验性变态反应性神经炎周围神经浸润CD4(+)T细胞的凋亡
为探讨实验性变态反应性神经炎(EAN)中周围神经浸润CD4(+)T细胞的凋亡,应用免疫组织化学和原位末端标记法动态检测不同发病阶段EAN大鼠坐骨神经浸润CD4(+)T细胞的形态学改变及断裂的DNA片段.结果发现具有凋亡形态学特征的浸润CD4(+)T细胞于免疫后第18d出现,在第22d达高峰后下降,第30d基本消失.原位末端标记法证实凋亡CD4(+)T细胞中存在断裂的DNA片段.提示CD4(+)T细胞凋亡是EAN浸润CD4(+)T细胞的重要清除机制.
