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高胆固醇血症大鼠主动脉内皮细胞NF-κB的激活和血小板源生长因子B链的表达
目的验证体外培养的内皮细胞经轻微修饰低密度脂蛋白(mm-LDL)刺激后激活细胞核因子κB(NF-κB)的现象可否同样在高胆固醇血症大鼠主动脉内皮细胞内出现并促进血小板源生长因子B链(PDGF-B)的表达,以及年龄对NF-κB-PDGF-B信号传导通路的影响.方法胃饲高胆固醇乳剂建立高胆固醇血症大鼠模型,免疫组织化学染色法[链霉素抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法]明确主动脉内皮细胞NF-κB激活后发生核转位的情况;应用原位杂交技术观察内皮细胞PDGF-B mRNA的表达,同时应用免疫组织化学染色法(SP法)观察内皮细胞合成PDGF-B链的情况.结果与对照组相比,胃饲高胆固醇乳剂6周后,2个月龄大鼠出现高胆固醇血症,主动脉内皮细胞NF-κB核转位的比例明显增加,PDGF-B mRNA的表达也增多.10个月龄对照组Wistar大鼠的主动脉内皮细胞几乎不表达PDGF-B mRNA,摄入高胆固醇乳剂16周后,内皮细胞表达PDGF-B mRNA明显增多.较之摄入胆固醇同时期的2个月龄大鼠,NF-κB的核转位及内皮细胞PDGF-B链的合成均增多(0.461±0.075比0.350 ±0.094;0.230±0.040比0.185±0.037),其差异有显著性意义(P<0.05;P<0.001).结论高胆固醇血症能激活大鼠主动脉内皮细胞的NF-κB,使核转位增多并促进内皮细胞表达PDGF-B.这一现象在10个月龄大鼠中表现得更为明显.
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人血小板衍生生长因子B链成熟肽基因克隆及表达
目的获得足量的PDGF-BB蛋白,作为PDGF-BB促进骨折愈合及创伤修复等进一步功能研究和临床应用的基础.方法用基因重组技术构建pQE-PDGF-B原核表达载体,在M15大肠杆菌中进行PDGF-B单体蛋白的表达.结果经酶切鉴定、PCR鉴定及基因测序证明,pQE30载体上成功地插入了PDGF-B成熟肽基因;重组表达载体pQE-PDGF-B在M15大肠杆菌中得到了高效表达,表达量约占全菌蛋白的15%,表达的PDGF-B单体蛋白经SDS PAGE电泳,显示了一条特异蛋白带,分子量为15 kD左右.结论 PDGF-B原核表达载体的成功构建和PDGF-B单体蛋白制备纯化为生产活性PDGF-BB蛋白及其进一步功能研究奠定了基础.
关键词： 原癌基因蛋白质c-sis类 基因表达 骨折愈合
