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中国狂犬病毒RdRp基因特点
目的 测定中国狂犬病毒人用疫苗株aG和减毒株CTN181的RdRp编码(L)基因序列并初步研究其结构和功能特点.方法 RT-PCR法获得若干交叉重叠小片段,序列拼接得到完整RdRp编码基因序列,利用生物学软件进行同源性和种系发生分析,并对RdRp保守功能序列和位点进行预测分析.结果 中国狂犬病毒aG和CTN181株的L蛋白分别由6387和6384个核苷酸编码的2128和2127个氨基酸组成,前者比后者在起始部位多编码一个Met.结构功能分析发现在L蛋白上存在若干可能对RNA合成、mRNA聚腺苷酸化和磷蛋白磷酸化以及甲基转移酶的功能起决定作用序列;种系发生树显示中国疫苗株aG相对独立于WHO推荐使用的其他疫苗株.结论 完整L基因结构揭示,对于全面了解中国狂犬病毒分子特征,发现新的功能位点,开发以RdRp为靶标的新型抗病毒药物研究以及弹状病毒科种系发生分析提供了有力的工具.
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柯萨奇B组病毒VP1胞质表达系统的建立
目的利用T7RNA聚合酶介导的胞质表达系统增加目的抗原的表达量,提高基因疫苗的免疫效果.方法(1)构建带有T7启动子、脑心肌炎病毒(EMCV)5'非编码区和柯萨奇B组病毒衣壳蛋白VP1的质粒pT7 EMCVP1.将该质粒和编码T7 RNA酶的pAR 3132共转染HeLa细胞和小鼠腹腔巨噬细胞;(2)将上述质粒分别转化减毒鼠伤寒沙门菌SL7207,让带有不同质粒的两种载体细菌共感染小鼠腹腔巨噬细胞.结果(1)经共转染,在HeLa细胞和小鼠腹腔巨噬细胞中,目的抗原VP1在胞质中的表达比单独转染真核表达质粒pcDNA3 VP1增加2～4倍;(2)两种质粒载体细菌感染小鼠巨噬细胞后,目的抗原VP1也能在细胞中较好表达.结论pT7 EMCVP1和pAR 3132能在HeLa细胞和小鼠腹腔巨噬细胞胞质中表达,且表达量比单独转染真核表达质粒pcDNA3 VP1明显增加.
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小鼠肥大细胞瘤基因疫苗的免疫治疗作用研究
目的探讨α-病毒RNA复制酶对基因疫苗的免疫学效应的加强作用,寻找更好的基因疫苗形式. 方法将小鼠肥大细胞瘤P815的肿瘤特异抗原P1A基因克隆到含SFV的RNA复制酶的真核表达载体pSMART2a中,以此作为肿瘤基因疫苗,观察该疫苗对P815种植瘤的防治作用、特异细胞毒T淋巴细胞激活和抗体的生成情况.结果该重组基因疫苗在体外有很好的表达,注射后CTL的大杀伤效率为60%,而普通载体疫苗形式pCI-neo/P1A则只有40%的杀伤活性;在观察期限内,前者的动物成瘤率和动物生存率分别为20%和40%,后者则分别为60%和20%.两种情况下都不能检测到任何特异抗体的产生.结论α-病毒RNA复制酶对基因疫苗的免疫学效应有加强作用.
