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重组腺病毒介导的p16INK4a表达诱导A549细胞衰老的研究
目的构建E1区缺失的复制缺陷型5型重组腺病毒载体,探讨p16INK4a基因对肺癌细胞株A549细胞增殖与衰老的影响.方法通过脂质体介导,将pAdCMV-p16INK4a与pJM17共转染人5型腺病毒E1基因转化的人胚肾细胞系293细胞,同源重组产生腺病毒空斑,用双重PCR筛选出携带p16INK4a基因的重组腺病毒并感染肺癌细胞A549,用免疫组化及Western blot检测腺病毒载体介导的基因转移效率和蛋白表达水平,分别用X-gal染色和TRAP-ELISA检测A549细胞中衰老相关β-半乳糖苷酶及端粒酶活性.结果腺病毒载体可将95%以上的p16INK4a基因转移到A549中,受感染细胞有外源p16INK4a蛋白表达,其生长受到明显抑制,即p16INK4a基因能诱导A549细胞表达衰老相关β-半乳糖苷酶,并抑制细胞中的端粒酶活性.结论复制缺陷型重组腺病毒,能有效地介导外源基因的转移与表达,可用于基因免疫和基因治疗;p16INK4a基因能抑制肺癌细胞A549生长并诱导其发生复制性衰老.
