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人博卡病毒感染支气管上皮细胞生物学特征的研究
目的 研究人博卡病毒(HBoV)在呼吸道感染中的致病性及机制.方法采用人博卡病毒阳性标本感染健康人支气管上皮细胞,观察HBoV感染支气管上皮细胞后的生物学特征,并进行病毒空蚀斑、红细胞吸附抑制及免疫荧光测定.结果 75%感染细胞变圆并堆积成葡萄状,伴随有坏死、破碎、脱落.病毒蚀斑测定出典型"猫头鹰眼"现象.红细胞吸附实验观察到90%以上红细胞附着感染支气管上皮细胞.荧光检测出在细胞核内具有典型荧光块.结论支气管上皮细胞可用于分离HBoV,HBoV感染支气管上皮细胞后能够在该细胞内增殖,并导致特征性生物学改变.本研究为今后人博卡病毒致病机制研究奠定基础.
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六神丸在细胞水平上抗腺病毒的初步研究
目的 建立腺病毒3型(HAdV-3)感染HEp-2细胞模型,评价六神丸混悬液对腺病毒感染HEp-2细胞病变的抑制作用,并进一步探讨六神丸在体外抗腺病毒的量效关系.方法 用乙醇回流法处理制备六神丸液.以MTT法计算药物的半数中毒剂量(TC50).通过三种不同给药方式即预防给药、治疗给药及直接灭活给药方式进行体外实验,观察六神丸液对HAdV-3感染HEp-2细胞病变所起的作用,并对药物的量效关系进行分析.结果 六神丸液TC50值为40.48 μg/ml.预防、治疗及直接灭活给药方式均可减轻HAdV-3感染HEp-2细胞的CPE程度,其抗HAdV-3的半数有效浓度(IC50)分别为28.91μg/m1、19.28 μg/m1、8.61 μg/ml,治疗指数(TI)分别为1.4、2.1和4.7,六神丸液对HAdV-3感染HEp-2细胞CPE的抑制作用存在着一定的量效关系.结论 在预防、治疗及直接灭活给药方式下,六神丸均有一定的抗HAdv-3的作用,但直接灭活效果更明显.
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穿心莲提取物抗柯萨奇病毒A16型感染的体外研究
目的 观察穿心莲提取物对柯萨奇病毒A16型(CVA16)的体外抑制作用.方法 采用CCK8法检测浓度为500.0、250.0、125.0、60.0、30.0、15.0、7.5和3.8 μg/mL的穿心莲提取物对非洲绿猴肾上皮细胞(Vero细胞)的毒性作用,用概率单位回归法计算半数抑制浓度(IC50).以利巴韦林(RBV)为药物对照,比较穿心莲提取物对CVA16感染Vero细胞的直接灭活病毒、阻断病毒吸附和抑制病毒复制作用,采用SPSS 24.0软件对数据进行分析.结果 根据细胞毒性试验选取药物溶度均分别为15.0、7.5和3.8 μg/mL的穿心莲提取物和利巴韦林进行抗CVA16实验.穿心莲提取物与利巴韦林在3个浓度下对CVA16既无直接灭活作用,也无阻断病毒吸附作用(F=1.54、1.52和0.67、1.68,P值均>0.05),两种药物在7.5和15.0 μg/mL时均能抑制CVA16在Vero细胞的复制(t=6.87、11.76和7.71、12.84,P<0.05).结论 体外实验表明,穿心莲提取物可通过抑制CVA16在Vero细胞内的复制,实现抗病毒作用.
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卷柏多糖对肠道病毒71型复制的体外抑制作用
目的 研究卷柏多糖对EV71病毒复制的体外抑制活性.方法 将卷柏多糖不同提取物设置不同剂量作用于人恶性横纹肌肉瘤细胞(RD),采用细胞病变效应(CPE)及细胞计数试剂盒(CCK8法)检测细胞存活率,并计算药物的半数中毒浓度(CC50)；培养EV71感染的RD细胞,建立体外病毒感染模型,并设立正常细胞对照组和阳性药物对照组(利巴韦林3.2mg/L),将卷柏多糖不同提取物设置不同剂量作用于EV71感染后的RD细胞,应用CCK8法检测药物抗病毒抑制率,并计算药物的半数抑制浓度(IC50)；收集药物作用于感染后RD细胞的培养液上清,进行荧光定量PCR检测,观察药物对EV71病毒RNA表达的影响.结果 卷柏30％醇沉多糖和50％醇沉多糖对RD细胞的CC50值分别为396和142 mg/L,抑制EV71病毒致CPE的IC50值分别为40.8和26.2 mg/L.与病毒感染对照组相比较,卷柏30％和50％醇沉多糖作用后,经EV71感染的RD细胞培养液中病毒RNA拷贝数显著降低(P＜0.05).结论 卷柏及其30％和50％醇沉多糖可以作为新的抗EV71的潜在药物.
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5种中药提取物体外抗病毒药效学研究
目的:探讨中药板兰根、黄芪、贯众、紫花地丁、大黄提取物体外抗病毒作用机制.方法:采用体外细胞培养法、染料摄入法检测5种中药抗病毒作用,以改变给药时间、途径,探讨5种中药抗病毒作用环节.结果:5种中药具有明显的抗呼吸道合胞病毒(RSV)、抗柯萨奇病毒A16、柯萨奇病毒B1、柯萨奇病毒B3、柯萨奇病毒B4的作用.结论:5种中药有较强的抗病毒作用.
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高滴度呼肠孤病毒3型的制备及滴度检测
目的 制备高滴度呼肠孤病毒3型(reovirus 3,Reo-3)病毒液,并检测Reo-3滴度.方法 以幼仓鼠肾细胞(BHK-21)为病毒培养基质和滴度测定细胞.将Reo-3按100至10-5感染复数(MOI)接种BHK-21,再分别用细胞病变法和蚀斑形成法检测病毒,用Karber法计算病毒滴度.结果 BHK-21感染Reo-3后能产生明显病变.以10-4 MOI的Reo-3接种后48 h,收获液中病毒滴度高,细胞病变法检测为9.625 lgTCID50/ml,蚀斑形成法检测为8.671 lgPFU/ml.结论 制备了高滴度Reo-3,为开展该病毒去除灭活研究奠定了基础.
关键词： 哺乳动物呼肠孤病毒3 致细胞病变 病毒 蚀斑形成法 -
热毒宁对流感病毒FM1的抑制作用
目的:研究中草药热毒宁注射液对流感病毒FM1的抑制作用.方法:以利巴韦林为阳性对照药,采用细胞培养技术及四氮唑蓝(MTT)比色法,观察在热毒宁干预下,受FM1感染的犬肾传代细胞(MDCK细胞)的病变效应(CPE)及光密度值(D),计算各组细胞的病毒抑制率.比较不同药物剂量及3种不同给药方式(预防给药、直接灭活及治疗给药)下热毒宁对流感病毒FM1的抑制作用.结果:热毒宁注射液半数中毒浓度(TC50)为10.11 g·L-1.预防给药、直接灭活及治疗给药方式下,CPE法测得其抗流感病毒FM1的半数有效浓度(EC50)分别为0.625、0.725、0.629 g·L-1,治疗指数(TI)分别为16.17、13.94、16.07;MTT比色法测得其抗流感病毒FM1的EC50分别为1.135、0.770、0.661 g·L-1,TI分别为8.91、13.12和15.29.3种方式给药,MTT法测定时,热毒宁对流感病毒FM1的抑制作用无差异;CPE法测定时,热毒宁浓度在0.812 51 g·L-1及以上对流感病毒FM1的抑制作用无差异.结论:热毒宁对流感病毒FM1有直接灭活及抑制增殖作用,对其感染靶细胞有阻断作用,且呈明显量效关系.
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热毒宁注射液对腺病毒-3的体外抑制作用
目的:研究中草药热毒宁注射液对腺病毒-3(ADV3)的抑制作用.方法:以阿昔洛韦为阳性对照药,采用细胞培养技术及MTT比色法,观察在热毒宁干预下,转染腺病毒E1A基因人胚肾上皮细胞(293细胞)的细胞病变效应(CPE)及光密度值(D),计算各组细胞的病毒抑制率.比较不同药物剂量及不同给药方式下热毒宁对ADV3的抑制作用效果.结果:热毒宁注射液半数中毒浓度TC50为15.58 g·L-1.预防、直接灭活及治疗给药方式下,CPE法测定的半数有效浓度EC50分别为1.452、1.321、1.193 g·L-1,治疗指数TI分别为10.73、11.79、13.06;MTT法测定的EC50分别为2.356、1.494、1.144 g·L-1,TI分别为6.61、10.43和13.62.结论:热毒宁对ADV3有直接灭活及抑制增殖作用,对其感染靶细胞有阻断作用,且呈明显量效关系.热毒宁对ADV3的抑制作用,以预防给药更明显.
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金黄色葡萄球菌肠毒素A基因在C57BL/6小鼠淋巴细胞中的表达
目的通过复制缺陷型腺病毒载体的介导,将金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)基因转染入C57BL/6小鼠淋巴细胞中,观察基因表达产物对B16细胞的作用.方法通过MTT法直接测定重组腺病毒颗粒感染的淋巴细胞的增殖情况,采用双抗体夹心ABC-ELISA法,测定淋巴细胞培养上清液中白介素2的水平.MTT法测定活细胞数目,以了解活化的C57BL/6小鼠淋巴细胞对B16细胞的杀伤效应.结果加入不同滴度的重组腺病毒颗粒后,C57BL/6小鼠淋巴细胞明显增殖;同时淋巴细胞培养上清液中白介素2水平也明显增加.重组腺病毒颗粒转染的C57BL/6小鼠淋巴细胞可明显杀伤B16细胞,效/靶比越高,杀伤效应越明显.结论SEA基因可以在C57BL/6小鼠淋巴细胞中表达,并且表达产物能够活化C57BL/6小鼠淋巴细胞,进而杀伤B16细胞.
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热毒宁注射液对人鼻病毒(N36)的体外抑制作用
目的:研究中草药热毒宁注射液对人鼻病毒(HRV, N36)的抑制作用.方法:以利巴韦林为阳性对照药,采用细胞培养技术及MTT比色法,观察在热毒宁干预下,人胚胎上皮细胞的病变效应(CPE)及吸收度值(A),计算各组细胞的病毒抑制率.比较不同药物剂量及不同给药方式下热毒宁对HRV的抑制作用效果.结果:热毒宁注射液半数中毒浓度TC50为5.873g/L.预防、直接灭活及治疗给药方式下,CPE法测定的半数有效浓度EC50分别为0.576、0.836及0.640g/L,治疗指数(TI)分别为10.20、7.03及9.18; MTT法测定的EC50分别为0.551、2.310及1.230g/L, TI分别为10.66、2.54及4.78.结论:热毒宁对HRV (N36)有直接灭活及抑制增殖作用,对其感染靶细胞有阻断作用,且呈明显量效关系.热毒宁对HRV (N36)的抑制作用,以预防给药更明显.
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一种培养鉴定风疹病毒的简便试验方法的建立
目的建立使风疹病毒(RV)在Vero细胞(非洲绿猴肾传代细胞株)上产生的细胞病变效应(CPE)易于观察的简便试验方法,以利于病毒的分离、培养与鉴定.方法在RV接种Vero细胞4天后,用不同pH值(4.0、4.5、5.0、5.5、6.0、7.0)的融合营养液处理细胞,继续按常规条件培养1天后,在倒置显微镜下观察RV引起的特征性CPE-多核巨细胞,染色后计数多核巨细胞的形成率.同时检测在不同条件(融合时间、病毒接种初始滴度)下,多核巨细胞形成率的变化.结果感染RV的Vero细胞经过酸性融合营养液的处理,可出现RV特征性CPE-多核巨细胞.发现在37℃、pH 5.0的酸性融合营养液处理染毒细胞10 min后,继续培养1天,出现的细胞病变形态典型,染色后计数发现多核巨细胞的形成率高,为14.7%(P<0.01).融合处理的时间对多核巨细胞的形成率没有影响.随着病毒接种初始滴度的降低,多核巨细胞的形成率也相应降低.结论此方法简单、易行,使RV在Vero细胞上产生的细胞病变清晰易观察.
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刺参糖胺聚糖抗风疹病毒的初步研究
目的 探讨刺参糖胺聚糖(SJ-GAG)对风疹病毒(RV)的抑制作用.方法 接种RV至BHK21细胞,同时分别加入不同浓度的SJ-GAG,观察病毒致细胞病变效应,MTT法及定量PCR法检测SJ-GAG的抗病毒作用和细胞毒性作用.结果 SJ-GAG浓度在3.2 g/L以上时,表现出一定的细胞毒性作用,在0.20～0.25 g/L浓度范围表现出抗病毒活性,并呈一定的量效关系,且无明显细胞毒性作用.结论 SJ-GAG有抗RV作用.
