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人LAK细胞抗菌活性多肽HLP-3P21的分离纯化和鉴定
目的分离纯化人LAK细胞小分子抗菌多肽,鉴定其分子特性,检测其抗菌活性. 方法采用密度梯度离心法分离人外周血单个核细胞,并用IL-2和PHA刺激培养.5%乙酸匀浆细胞获得其酸溶性提取物.应用制备酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反相高效液相色谱技术分离纯化多肽,Tricine-SDS-PAGE鉴定其相对分子质量(Mr),运用琼脂糖弥散法鉴定其抗菌活性,采用Edman降解法测定其氮端序列,并进行肽质谱分析. 结果从人LAK细胞酸溶性提取物中纯化出一多肽,Tricine-SDS-PAGE表观Mr为17×103,命名为HLP-3P21(human lymphocyte peptide),具有抗致病性大肠杆菌ML-35P及铜绿假单胞菌ATCC65922的活性.其氮端序列为PKRKAEGDAK,肽质谱的检索分析未发现匹配度大于50%的蛋白质分子. 结论 HLP-3P21可能为LAK细胞一新的抗菌效应分子.
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人淋巴因子激活的杀伤细胞抗生素肽的分离纯化
目的分离纯化人淋巴因子激活的杀伤细胞(lymphokine activated killer, LAK)内源性抗生素肽.方法采用密度梯度离心法分离人外周血单核细胞,并用IL-2和P HA刺激培养.5%乙酸匀浆细胞获得其酸溶性提取物.应用制备性酸性尿素聚丙烯酰胺凝胶电泳技术和反相高效液相色谱技术分离纯化多肽,Tricine-SDS-PAGE鉴定其分子量,并运用琼脂糖弥散法鉴定其抗菌活性.结果从人LAK细胞酸溶性提取物中纯化出多个多肽,其中HL P-2b、HLP-3a完全纯化,分子量分别为7.9×103 u和4×103 u. HLP-2a、HLP-2c 、HLP-3b和HLP-3c基本纯化,主带分子量分别为7.2×103 u、10.4×103 u、6.4×10 3 u、6.4×103 u.HLP-3a具有抗金黄色葡萄球菌活性,HLP-2a、HLP-2b、HLP-2c、HLP-3b、HLP-3c具有抗金黄色葡萄球菌活性和抗白色念珠菌活性.结论人LAK细胞含多种内源性抗生素肽分子.
