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自然杀伤细胞表面获取 HLA-G1抗原机制研究
目的：自然杀伤细胞（ NK）不表达HLA-G抗原，将其与K562-G1细胞共培养，可检测到NK细胞表面表达HLA-G1蛋白，研究NK细胞表面获取HLA-G1抗原的机制。方法建立稳定表达HLA-G1抗原的K562细胞株；分别将K562-G1、K562、脱落的HLA-G1与NK-92MI细胞共培养，以及将HLA-G1与NK-92MI细胞上的HLA-G受体进行阻断后进行共培养，通过流式细胞术及荧光显微镜技术检测NK-92MI细胞对HLA-G1蛋白的获取情况。通过基于CD107a标记的流式细胞术，检测K562细胞表达HLA-G1前后对NK-92MI细胞杀伤活性的影响。结果 NK-92MI细胞能通过细胞间的相互接触转移快速获取K562-G1细胞表面的HLA-G1蛋白。 HLA-G特异性抗体87G阻断或其受体KIR2DL4特异性抗体＃33和ILT2受体特异性抗体阻断后，均不影响NK-92MI细胞对HLA-G1的获取。功能研究显示，HLA-G1能显著抑制NK细胞对K562细胞的杀伤活性（P＜0．01）。结论 NK细胞通过胞啃机制快速获取HLA-G1蛋白，其转移机制与受体配体间的亲和力、HLA-G1分子胞外结构域及非特异性的被动黏附作用无关。
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膜型HLA-G1对异种细胞毒T淋巴细胞的诱生和细胞毒性的影响
目的 探讨膜型HLA-G1对人抗鼠细胞毒T淋巴细胞(CTL)诱生和细胞毒性作用的影响.方法将稳定表达HIA-G1的小鼠NIT-1细胞株G1-NIT-1作为刺激细胞,与人外周血淋巴细胞混合,进行异种淋巴细胞-肿瘤细胞混合培养诱生出人抗鼠CTL,并用MTT法检测CTL特异性细胞毒性.结果用G1-NIT-1细胞诱导的人抗鼠CTL细胞对NIT-1细胞的杀伤率(32.21±20.52)%低于NIT-1-pcDNA3细胞诱导的人抗鼠CTL的杀伤率(56.41±14.80)%,两者差异具有统计学意义(P<0.05);但用NIT-1细胞诱导的人抗鼠CTL对NIT-1-pcDNA3、G1-NIT-1细胞的杀伤率分别为(50.03±18.98)%、(52.54±17.90)%,差异无统计学意义(P>0.05).结论 HLA-G1能够通过抑制异种排斥反应中人抗鼠CTL的诱生,间接抑制人CTL对异种靶细胞的毒性.
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从妊娠人胎盘绒毛组织克隆HLA-G1 cDNA
为系统研究HLA-G1分子的生物学功能，采用RT-PCR技术，从人流的胎盘绒毛组织中提取总RNA，经过逆转录合成HLA-G1的全长cDNA，插入到真核表达载体pcDNA3中，构建重组表达质粒pcDNA3-HLA-G1；转化大肠杆菌DH5α，筛选其阳性克隆株，经酶切、PCR及测序鉴定，证实HLA-G1分子的重组真核表达载体已构建成功。
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膜表达的HLA-G1对同种反应性PBMC分泌Th1/Th2型细胞因子的影响
目的研究人脐静脉内皮细胞系(ECV304)表达的HLA-G1对同种异体外周血单个核细胞(PBMC)Th1/Th2型细胞因子分泌的影响.方法采用脂质体介导的基因转染技术将pcDNA3-HLA-G1转入ECV304,以间接免疫荧光技术在蛋白质水平上检测HLA-G1分子在ECV304上的表达;以表达HLA-G1的ECV304作为刺激细胞,灭活后,与健康人PBMC共同培养,用ELISA检测上清液中Th1/Th2型细胞因子的浓度,观察HLA-G1对同种异体抗原激活的PBMC分泌Th1/Th2型细胞因子的影响.结果与转染pcDNA3空质粒的对照组相比,HLA-G1能使PBMC的IL-10分泌增加(P＜0.05),而IL-2,IFN-γ、IL-4分泌无明显影响.结论HLA-G1能引起由同种异体抗原激活的PBMC分泌IL-10增加,提示HLA-G1有可能使Th1/Th2型细胞因子向Th2型偏移.
关键词： HLA-G1 ECV304 Th1/Th2型细胞因子 同种移植 免疫耐受 -
表达HLA-G1的K562细胞抵抗外周血NK细胞杀伤作用的研究
目的研究HLA-G1分子对NK细胞杀伤活性的影响.方法借助脂质体介导的DNA转染技术,将本室构建的真核表达质粒pcDNA3-HLA-G1转染人K562细胞;通过G418筛选,获得克隆化细胞株K562-G1;应用RT-PCR及流式细胞术分别在RNA水平和蛋白质水平检测HLA G1的表达;后,应用MTT比色法检测转染细胞对不同个体外周血NK细胞杀伤活性的抑制效应.结果与转染了空质粒的对照组相比,外周血NK细胞对K562-G1的杀伤率降低32.43%(P＜0.01).结论靶细胞表达HLA-G1分子可明显抑制NK细胞的杀伤效应.
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血管内皮细胞(ECV304)表达的HLA-G1对NK细胞杀伤活性的抑制作用
目的: 证实HLA-G1分子能够抑制NK细胞对同种血管内皮细胞系的杀伤作用.方法: 采用脂质体介导的DNA转染技术, 以构建的真核表达质粒pcDNA3-HLA-G1转染人脐静脉内皮细胞系ECV304, 再用免疫荧光法检测表达的HLA-G1分子.并用MTT比色法检测HLA-G1对NK细胞杀伤活性的影响.结果: ECV304细胞上可稳定表达HLA-G1.NK细胞对空质粒pcDNA3转染的ECV304细胞的杀伤率为(50.6±18.1)%;而对pcDNA3-HLA-G1转染的ECV304细胞的杀伤率为(29.7±11.4)%, 两者差异具有显著意义(P <0.01).结论: HLA-G1分子可明显抑制NK细胞对同种血管内皮细胞的杀伤效应.
