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CⅡTA基因编码区不同单倍型cDNA的功能研究
目的 研究MHCⅡ类反式激活因子(cⅡTA)基因编码区非同义单核苷酸多态性(SNP)位点C19170G(Leu45Val)和C30799G(Ala500Gly)构成的4种不同单倍型cDNA的功能.方法 将4种不同单倍型的真核表达载体和卒载体分别转染至HeLa细胞.用RT-PCR和间接细胞免疫荧光技术检测未经转染的HeLa细胞、转染4种真核表达载体及卒载体的HeLa细胞cⅡTA mRNA与3种HLAⅡ类分子(HLA-DR、DP、DQ)的表达,并用流式细胞技术对其表达的3种HLAⅡ类蛋白进行定量分析.结果 未经转染和转染空载体的HeLa细胞均尤CⅡTA mRNA和3种HLAⅡ类分子的表达,而转染4种不同单倍型真核表达载体的HeLa细胞均出现CⅡTA mRNA表达,并表达3种HLAⅡ类分子.证实了转染4种不同单倍型真核表达载体后的HeLa细胞3种HLAⅡ类分子表达水平差异无统计学意义(P均>0.05).结论 中国人CⅡTA基因编码区这两个SNP位点的多态性(2个位点氨基酸的改变)不影响CⅡTA反式激活HLAⅡ类基因表达的能力.
关键词： MHCⅡ类反式激活因子 单核苷酸多态性 单倍型 HLAⅡ类分子 -
人CⅡTA基因不同单倍型cDNA真核表达载体的构建
目的 构建人MHC Ⅱ类反式激活因子(CⅡTA)基因3种不同单倍型cDNA的真核表达载体.方法 以野生型重组质粒EBS-NPL-CⅡTA cDNA为模板,用重叠延伸PCR定点突变技术对CⅡTA基因编码区的两个非同义单个核苷酸多态性(SNP)位点进行突变,制备CⅡTA基因另外3种单倍型cDNA的部分片段.将其分别克隆至EBS-NPL-CⅡTA酶切后的线性化载体上,通过菌落PCR及酶切鉴定获得阳性克隆,并对其进行测序鉴定.然后将4种单倍型的真核表达载体和空载体EBS-NPL分别转染至HepG2细胞,用间接细胞免疫荧光技术检测其HLA-DR分子的表达.结果 成功制备人CⅡTA基因3种单倍型cDNA的部分片段,并获得含有CⅡTA基因3种不同单倍型cDNA完整序列的真核表达载体.证实未经转染和转染空载体的HepG2细胞无HLA-DR分子的表达,转染4种真核表达载体的HepG2细胞均可表达HLA-DR分子.结论 成功构建人CⅡTA基因不同单倍型的真核表达载体,为研究CⅡTA基因不同单倍型功能之间的差异奠定基础.
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人CIITA基因启动子Ⅳ不同单倍型DNA真核表达载体的构建
目的:构建人MHC Ⅱ类反式激活因子(CIITA)基因启动子Ⅳ4种不同单倍型DNA的真核表达载体.方法:根据人CIITA基因启动子Ⅳ区的2个单个核苷酸多态性(SNPs)位点C-1350T和G-944C,可以构建出4种单倍型(CG、CC、TG和TC).分别以CG/CG、CC/CC、TG/TG和TC/TC4种基因型的人基因组DNA为模板,用PCR法扩增出包含启动子Ⅳ两个SNP位点的长487bp的DNA片断,TA克隆至pMD18-T Simple载体后用MluⅠ/HindⅢ双酶切,纯化回收后分别与同样双酶切的荧光素酶报告基因载体PGL3一Basic和PGL3-Promomr相连接,构建CG-PGL3一Basic、CG-PGL3-Promoter、CC-PGL3-Basic、CC-PGL3-Promoter、TG-PGL3-Basic、TG-PGL3-Promoter、TC-PGL3-Basic、TC-PGL3-Promoter8个表达载体,并测序验证其DNA序列.结果:实验得到含有人CIITA基因启动子Ⅳ4种不同单倍型DNA序列的真核表达载体8个,且测序证实了这8个表达载体序列与理论序列完全一致.结论:成功构建人CIITA基因启动子Ⅳ不同单倍型的真核表达载体,为CIITA基因启动子Ⅳ不同单倍型的功能研究奠定基础.
关键词： MHCⅡ类反式激活因子 单个核苷酸多态性 单倍型 -
MHCⅡ类反式激活因子在上调HepG2细胞HLAⅡ类分子表达中的作用
目的 探讨主要组织相容性复合物(major histocompatibility complex,MHC)Ⅱ类反式激活因子(class Ⅱ transactivator , CⅡTA)在调控HepG2细胞HLAⅡ类分子表达中的作用.方法 将含CⅡTA cDNA的真核表达载体EBS-NPL-CⅡTA和不含CⅡTA cDNA的空载体EBS-NPL分别转染至HepG2细胞.用RT-PCR技术检测未经转染的HepG2细胞、转染EBS-NPL-CⅡTA及空载体EBS-NPL的HepG2细胞CⅡTA mRNA的表达,并用间接细胞免疫荧光技术及流式细胞技术检测其3种HLAⅡ类分子(HLA-DR、DP、DQ)的表达.结果 未经转染的HepG2细胞和转染空载体EBS-NPL的HepG2细胞均无CⅡTA mRNA和HLAⅡ类分子的表达.转染EBS-NPL-CⅡTA后的HepG2细胞出现CⅡTA mRNA表达,并表达3种HLAⅡ类分子.结论 CⅡTA是调控HepG2细胞是否表达HLAⅡ类分子的关键因子,HepG2细胞不表达HLA-Ⅱ类分子与其缺乏CⅡTA表达有关,为进一步研究CⅡTA在肝癌治疗中的作用奠定基础.
关键词： MHCⅡ类反式激活因子 HepG2细胞 HLAⅡ类分子 -
CⅡTA基因启动子Ⅳ区G-944C多态性与慢性HBV感染发病易感性的关系研究
目的 探讨MHCⅡ类反式激活因子(CⅡTA)启动子Ⅳ区G-944C基因多态性与慢性乙型肝炎病毒(HBV)感染发病易感性的关系.方法 在1 203例慢性HBV感染无症携带与慢性肝患者中,应用序列特异性引物PCR技术(PCR-SSP)对CⅡTA基因启动子Ⅳ区G-944C位点进行基因分型研究.结果 CC基因型频率在2组人群中分别为25.7%和19.7%,彼此间相差显著(χ2=5.560,P=0.018),而GC基因型频率分别为43.6%和49.9%,彼此间相差显著(χ2=4.774,P=0.029);在G基因显性模式下(C基因隐性模式),即GG+GC基因型频率在无症状携带和发病组人群中分别为74.3%和80.3%,两者间相差显著(χ2=5.560,P=0.018);在慢性肝炎、慢性重型肝炎和肝炎肝硬变3组人群中,C等位基因频率分别为44.1%、45.8%和45.0%,彼此间相差不显著(P＞0.05).结论 CⅡTA基因启动子Ⅳ中的G-944C位点多态性与慢性HBV感染者发病易感性存在一定的关系,而与疾病的严重程度无明显关系;基因型为CC纯合子的慢性HBV感染者不容易发展成慢性肝病.
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MHCⅡ类反式激活因子与病毒感染的关系
MHCⅡ类反式激活因子(ClassⅡtransactivator,CⅡTA)通过调控细胞是否表达MHCⅡ类分子及其水平而决定宿主是否对外来病毒感染产生免疫应答及其程度,从而影响病毒感染的发生、发展与转归.本文介绍了CⅡTA的结构与功能、IFNγ诱导MHCⅡ类基因表达的机制及CⅡTA分子与病毒间的相互作用.
关键词： 病毒 MHCⅡ类反式激活因子 主要组织相容复合物
