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赖型钩端螺旋体及澳洲型钩端螺旋体的ompL1和flaB2抗原基因序列分析
目的 构建赖型钩端螺旋体017株及澳洲型钩端螺旋体607株外膜蛋白抗原基因ompL1和内鞭毛抗原基因flaB2的重组质粒，并分别对ompL1及flaB2基因进行序列分析。 方法 通过聚合酶链反应扩增ompL1及flaB2，并将其分别克隆到pcDNA3.1/Myc-His(+)载体T7启动子下游，构建抗原基因表达质粒，进行序列测定分析。 结果 序列分析显示赖型钩体017株与澳洲型钩体607株的ompL1相同碱基949个（98.85%），碱基变异11个（1.15%）；flaB2的相同碱基823个（96.94%），碱基变异26个（3.06%），呈很高的保守性。 结论 赖型钩体017株与澳洲型钩体607株的ompL1及flaB2分别具有高度同源性。
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问号赖型钩体017株与七日热型钩体56610株内鞭毛蛋白基因的克隆及序列分析
目的:通过不同型钩体DNA序列分析筛选钩体基因疫苗的候选株,并从基因水平解释钩体血清型的特异性.方法:(1)酚、氯仿抽提法提取017株与56610株钩体基因组DNA.(2)分别以017株与56610株钩体基因组DNA为模板,PCR法扩增内鞭毛蛋白(flaB)基因.(3)T/A快速克隆法将两个flaB基因的PCR产物连接与Teasy-vector载体.(4)α-互补、PCR法初步筛选重组质粒.(5)碱裂解法小量提取质粒、酚切分析进一步鉴定重组质粒,确定外源基因插入方向.(6)双脱氧终止法对重组质粒的克隆化flaB基因进行测序.(7)应用软件对所测序列进行酶切位分析及编码蛋白的预测.(8)与已发表的钩体内鞭毛基因进行比较.结果:经鉴定获得了两个重组质粒pDHTF017与pDHTF610.pDHTF017中flaB基因为反向插入,pDHTF610中的flaB基因为正向插入.两个重组外源flaB基因长度均为852 bp,编码蛋白含283个氨基酸,预测分子量为31.5 kD左右.两个基因的限制性内切酶位点相似,含多个常见酶切位点.几个血清型钩体的flaB基因比较发现型间同源性很高(90%-99%),变异通常发生在固定位点,各型选择不同的固定位点.结论:(1)重组质粒pDHTF017与pDHTF610中的外源基因均为钩体的一种flaB基因; (2)flaB基因保守性强,可作为基因疫苗的靶基因;(3)七日热型钩体56610株的flaB基因有望成为核心抗原基因,可进行钩体疫苗的研究开发.
