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人巨细胞病毒PP150蛋白C端多肽与gp52蛋白片段的融合表达
目的将人巨细胞病毒PP150蛋白C端多肽与gp52蛋白片段融合, 构建表达该融合蛋白的工程菌. 方法合成PP150蛋白C端25个氨基酸的基因片段,并选用细菌偏爱的密码子.用PCR方法扩增gp52蛋白基因片段.将这2个基因片段分别克隆至同一质粒pET28a(+)内的NcoⅠ/BamHⅠ和BamHⅠ/EcoRⅠ位点,使两者串联在一起, 并且翻译框架一致,可表达1个融合蛋白.将重组质粒转化大肠杆菌,用酶切及SDS-PAGE等方法筛选表达融合蛋白的工程菌. 结果构建成功了高效表达PP150 C端多肽与gp52蛋白片段的融合蛋白工程菌,表达量为35%左右.初步纯化获得了表达的融合蛋白. 结论初步纯化的融合蛋白能与已知的抗gp52-IgM阳性血清和抗PP150-IgM阳性血清反应,说明融合蛋白C端的gp52蛋白保持较好的抗原性,融合蛋白N端的PP150 C端多肽也显示有抗原性.
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人巨细胞病毒pp150-gp52蛋白原核可溶性表达与IgM捕获ELISA方法建立和应用
目的 原核系统内表达并纯化巨细胞病毒pp150-gp52融合蛋白优势抗原表位,建立IgM捕获ELISA方法并应用.方法 通过重叠PCR技术扩增获得巨细胞病毒pp150-gp52优势片段核酸序列,在原核系统内可溶性表达DsbCpp150-gp52融合蛋白并纯化,用Western blot和ELISA检测融合蛋白的特异性和应用价值.结果 纯化获得的融合蛋白DsbC-pp150-gp52经酶标记建立IgM捕获ELISA方法,检测60份临床阳性血清和60份健康人血清.其中以酶标记DsbC-pp150-gp52蛋白建立的捕获ELISA法阳性检出率96.7％,阴性检出率100％,初步验证DsbC-pp150-gp52融合肽具有非常好的抗原特异性.结论 融合蛋白DsbC-pp150-gp52在大肠埃希菌中以可溶性表达形式存在,获得的高纯度重组融合蛋白具有抗原性和特异性强的特点,采用IgM捕获ELISA的实验方法,可开发检测试剂盒用于风疹病毒的早期检测.
