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利用噬菌体随机肽库筛选抗呼吸道合胞病毒多肽的实验研究
目的采用完整的呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)颗粒筛选噬菌体肽库,以获得能高亲和力结合并能抑制该病毒复制的特异性多肽.方法Hep-2细胞培养RSV,采用蔗糖密度梯度(30%、45%、60%)和超滤离心纯化病毒.病毒用生物素标记后,应用M13噬菌体PⅢ呈现随机7肽库进行筛选.经过3轮淘筛后,ELISA进一步鉴定噬菌体克隆与RSV的亲和力,通过TCID5o检测其抗病毒复制能力.选取与RSV具有高亲和力的阳性克隆进行DNA测序,据此推导多肽的氨基酸序列.结果经鉴定得到13个阳性噬菌体克隆能与RSV呈高亲和力结合,其中3个克隆体外能明显抑制RSV的复制,使TCID5o由10-8.1SFU/m1分别降至10-4.1、10-4.3、10-3.8SFU/ml.DNA测序发现各个克隆之间缺乏明显的同源序列,但普遍含有较多的脯氨酸.结论通过噬菌体肽库能够筛选到抗病毒作用的阳性克隆,为进一步开发高效RSV的诊断和治疗试剂奠定基础.
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从噬菌体随机肽库中筛选拮抗IL-5的抑制多肽
目的通过噬菌体随机肽库筛选与白细胞介素5 (IL-5)高亲和力结合的相关多肽,观察这些多肽是否能够抑制IL-5的生物功能.方法以重组人IL-5作为筛选分子,应用M13噬菌体PⅢ呈现随机7肽库进行筛选,经ELISA进一步鉴定噬菌体克隆与IL-5的亲和力.阳性噬菌体克隆呈现多肽和人工合成多肽对IL-5介导的嗜酸细胞(Eos)存活的影响.结果经过3轮淘筛后,经鉴定得到9个阳性噬菌体克隆能与IL-5呈高亲和力结合,其中3个具有抑制IL-5介导的Eos存活延长作用.选择抑制作用强的呈现多肽进行人工合成,发现其中一个合成多肽能够诱导Eos凋亡,抑制IL-5介导的存活延长作用,但作用强度不如噬菌体呈现多肽.结论通过噬菌体肽库能够筛选到抑制IL-5功能的相关多肽,为进一步研究抗IL-5的分子药物奠定了基础.
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利用噬菌体随机肽库筛选IL-5结合的相关多肽
目的:采用噬菌体随机肽库筛选人IL-5,以获得能高亲和力结合IL-5的相关多肽.方法:以重组人IL-5作为筛选分子,应用M13噬菌体PIII呈现随机7肽库进行筛选.经过三轮淘筛后,经夹心ELISA、竞争ELISA法进一步鉴定噬菌体克隆与IL-5的亲和力,对阳性克隆进行了扩增和DNA测序,据此推导结合随机多肽的氨基酸序列.结果:经鉴定得到9个阳性噬菌体克隆能与IL-5呈高亲和力结合.通过测序和序列比较分析,发现CX1-2AS为相对保守的结合表位.结论:研究表明通过噬菌体肽库能够筛选到IL-5结合的相关多肽,为进一步研究IL-5结合表位及抑制剂奠定了基础.
