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HIV/HCV共感染患者病毒特异性CTL细胞定量研究
目的探讨病毒特异性CTL对HIV/HCV共感染患者病情进展的影响机制. 方法观察对象为HIV/HCV共感染患者、单纯HIV感染者、单纯HCV感染者.采用四聚体技术,运用流式细胞仪检测病毒特异性CTL.前瞻性比较HIV、HCV特异性CTL在三组中的异同,并对HIV/HCV共感染患者的HIV、HCV特异性CTL进行相关性分析. 结果 HIV/HCV共感染组与单纯HIV感染组比较HIV特异性CTL,差异无显著性(P=0.586).HIV/HCV共感染组中HCV特异性CTL的百分数及绝对计数(0.37±0.29, 3.52±3.79)均高于单纯HCV感染组(0.15±0.05, 0.86±0.33),差异有统计学意义(P=0.001, P=0.002).HIV/HCV共感染组中的HIV特异性CTL与HCV特异性CTL存在正性线性相关(P<0.001),方程成立.并且各系数均有统计学意义,方程似然比(r2)0.761. 结论 HCV特异性CTL可能是HIV/HCV共感染组中肝脏功能损伤加重的原因之一;HIV与HCV在同一患者存在相互影响.
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卡介菌多糖核酸提高复发性生殖器疱疹患者CD8+ T细胞的细胞因子表达
目的研究卡介菌多糖核酸(BCG-PSN)对复发性生殖器疱疹(RGH)患者外周血CD8+ T细胞IL-12、IFN-γ、IL-4表达的影响. 方法应用流式细胞仪对45例RGH患者和15名健康志愿者外周血CD8+ T细胞IL-12、IFN-γ和IL-4的表达进行检测. 结果治疗前RGH患者外周血IFN-γ和IL-12阳性CD8+ T细胞百分率均显著下降(P<0.05),Tc1/Tc2平衡失调(P<0.05).治疗后BCG-PSN组外周血IL-12和IFN-γ阳性CD8+ T细胞百分率显著升高(P<0.05),Tc1/Tc2恢复平衡.病例对照组IL-12、IFN-γ及IL-4阳性CD8+ T细胞百分率于治疗前后变化差异均无显著性(P>0.05).BCG-PSN组与病例对照组治疗前后IL-12、IFN-γ阳性CD8+ T细胞百分率间差异均有显著性(P<0.05).BCG-PSN组复发率较低,复发病情较轻. 结论 RGH患者存在以Tc1水平低下为主的Tc1/Tc2比例失衡和IL-12表达水平低下;BCG-PSN通过上调外周血CD8+ T细胞IFN-γ、IL-12的表达,纠正机体细胞因子失衡状态而减少疾病的复发.
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小儿EB病毒感染200例临床病例报道
目的：探讨小儿EB病毒（EBV）感染的临床情况。方法：抽取本院接诊的小儿EB病毒感染患儿200例作为研究对象，根据急慢性分为两组，急性组120例、慢性组80例。两组均进行实验室检查，对比分析两组检查结果。结果：EB病毒感染患儿首发症状主要有发热、咳嗽、咽痛及淋巴结肿大等；对比分析急性组与慢性组实验室指标可知，急性组总T细胞、CD8+ T细胞及CD8+ T细胞/HLA-DR均显著高于慢性组（P<0.05）。结论：EB病毒感染患儿临床表现复杂，而且常累及多种系统，总T细胞、CD8+ T细胞及CD8+ T细胞/HLA-DR等可作为急性与慢性的判别标准，同时加强CD8+ T细胞监测，对预后也有着积极的意义，应加强重视。
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T 淋巴细胞与 1 型糖尿病
CD4+、CD8+ T淋巴细胞在1型糖尿病(DM)发病中起重要作用.近年研究发现,T淋巴细胞在胰岛自身抗原刺激下发生增殖,该细胞在浸润胰岛过程中需要粘附分子参与,CD4+ T淋巴细胞通过分泌细胞因子参与1型DM的发病过程,CD8 + T淋巴细胞在1型DM发病早期有重要作用,且与CD4+T淋巴细胞有协同作用.
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乙型肝炎肝硬化患者外周血T淋巴细胞亚群和NK细胞的变化及临床意义
目的：探讨乙肝肝硬化患者外周血中T淋巴细胞亚群及NK细胞含量的变化，了解乙肝肝硬化患者的免疫功能状况。方法乙肝肝硬化患者81例，并按Child-Pugh分为A、B、C三级，26例健康者作为健康对照，采用流式细胞仪检测血清中CD3＋ T淋巴细胞、CD4＋ T淋巴细胞、CD8＋ T淋巴细胞和NK细胞的含量。结果 Child-Pugh B级和C级的乙肝肝硬化患者外周血中CD3＋ T淋巴细胞、CD4＋ T淋巴细胞和NK 细胞的含量明显降低，而CD8＋ T淋巴细胞含量升高，与健康对照组比较，差异有统计学意义（P＜0．05），而Child-Pugh A级的乙肝肝硬化患者T淋巴细胞亚群变化不明显（P＞0．05）。结论乙肝肝硬化患者的机体免疫功能低下，并且随着其肝功能下降及Child-Pugh 分级的增加而显著，对判断乙肝肝硬化患者的病情及预后具有重要的临床价值。
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颗粒酶-B在大鼠心肺复苏后脑组织中的表达及其意义
目的 观察大鼠心搏骤停(cardiac arrest,CA)、心肺复苏(cardiopulmonary resuscitation,CPR)后早期,脑中颗粒酶-B(granzyme B,Gra-B)、穿孔素表达及CD8+T细胞含量的变化,探讨其在CPR后脑损伤中的意义. 方法 雄性Wistar大鼠按随机数字表法分为两组:复苏组和假手术组,复苏组又按取材时间不同分为12 h组、1d组、3d组3个亚组.假手术组大鼠仅进行麻醉和气管插管、血管穿刺,不进行窒息及CPR,于术后1d处死取样.以夹闭气管导管,窒息6 min的方法成功建立大鼠CPR模型后,用平衡木行走实验及肌力测定实验检测大鼠神经功能的变化.通过检测脑组织中伊文蓝(evans blue,EB)的含量说明血脑屏障(blood-brain barrier,BBB)的破坏程度,应用免疫组化染色,Western blot以及免疫荧光染色技术检测脑组织内CD8+T细胞浸润、Gra-B和穿孔素表达的变化以及CD8+T细胞和Gra-B的共表达情况. 结果 与假手术组比较,复苏组大鼠CPR后的感觉运动功能和肌力明显减退,其评分在第3天达到低[复苏组(4.0±0.7)分,假手术组(0.9±0.3)分(P＜0.01)],第4、5天开始恢复.CPR后大鼠BBB通透性增大,脑皮质和纹状体中CD8+T细胞的浸润以及Gra-B的表达增多,在1 d Gra-B的表达增加明显[皮质中1d组(0.95±0.08)比假手术组(0.35±0.09)(P＜0.05);纹状体中1d组(1.08±0.15)比假手术组(0.39±0.09)(P＜0.05)].CD8+T细胞与Gra-B在脑中共表达. 结论 CA-CPR后,大鼠脑中BBB通透性增加,CD8+T细胞浸润并释放Gra-B及穿孔素,参与脑神经损伤.
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肺结核患者外周血CD4+、CD8+ T细胞Blimp-1表达下降
目的：研究活动性肺结核患者外周血单个核细胞( PBMCs) Blimp-1的表达及临床意义。方法采集31例活动期肺结核患者和45位健康对照组外周血,纯化PBMCs,用结核分枝杆菌ESAT-6和CFP-10混合性抗原肽库刺激,通过细胞表面标记和细胞内细胞因子染色技术,采用流式技术检测CD4+、CD8+T细胞Blimp-1的表达。结果与对照组比较,肺结核患者PBMCs中的CD4+、CD8+T细胞亚群分布出现显著性下降,且肺结核患者 CD4+T 细胞中 Blimp-1的表达比例(%)下降(肺结核组89．5%(83．8%,95．7%),对照组94．5%(89．8%,98．7%),P<0．05),且CD4+、CD8+T细胞中Blimp-1的表达量(平均荧光强度)也显著性下降(CD4+T细胞：肺结核组9．28(7．5,18．9),对照组15．4(11,25．4),P <0．05)；CD8+T 细胞：肺结核组9．01(6．08,14．7),对照组14．2(9．53,23．1),P<0．05)。结论活动期肺结核CD4+、CD8+T细胞群内Blimp-1的表达下降可能会使效应性和调节性T细胞的分化出现异常。 Blimp-1可能参与结核病的疾病进程,这为研究结核病的诊断和治疗提供了线索。
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CD160在 EB 病毒感染患儿 T 淋巴细胞上的表达及临床意义
目的：探讨共抑制分子CD160在EB病毒感染患儿外周血CD8＋ T淋巴细胞上的表达及临床意义。方法选取2013年1月～2014年12月在武汉市妇女儿童医疗保健中心就诊的急性EB病毒感染患儿、慢性EB病毒感染患儿和同期健康对照儿童各27例。酶联免疫吸附法（ELISA）检测血清EB病毒特异性抗体，实时荧光聚合酶链反应法（Real‐time PCR）定量检测外周血淋巴细胞EBV‐DNA ，流式细胞仪检测外周血CD4＋、CD8＋ T细胞亚群比例以及共抑制分子CD160、PD‐1和2B4在CD8＋ T细胞上的表达率，并将CD160、2B4的表达率与外周血病毒载量行相关性分析。结果急性感染患儿外周血淋巴细胞CD4＋／CD8＋比值急剧降低，慢性感染患儿该比值有所恢复；与对照组相比，共抑制分子CD160和2B4在慢性感染患儿外周血CD8＋ T细胞上的表达明显增高（ P＜0.05），而在急性感染患儿中的表达无明显变化，PD‐1在急、慢性感染患儿中的表达均无明显变化；CD160在CD8＋ T 细胞上的表达率与患儿外周血EB病毒载量呈正相关（ r＝0.4458，P＜0.05），而2B4的表达率与病毒载量无明显相关性。结论 CD160在慢性EB病毒感染患儿外周血CD8＋ T细胞上的表达上调，且与外周血EB病毒DNA载量呈正相关。
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免疫磁珠负性分离纯化小鼠脾脏CD8+ T细胞
目的 探讨小鼠脾脏CD8+ T细胞的免疫磁珠负性分选方法,并对分选后所得细胞进行纯度、活力及功能检测.方法 以免疫磁珠负性分选法从小鼠脾脏细胞中分离CD8+ T细胞,流式细胞术检测所得细胞的纯度,台盼蓝检测细胞活力并用ConA刺激检测增殖能力. 结果 经过流式细胞仪测定免疫磁珠负性分选后的小鼠脾脏CD8+ T细胞纯度达到(91.6±3.6)%,台盼兰染色细胞活力为(94.9±3.2)%,ConA刺激72 h后有(56.3±1.7)%的细胞增殖.结论 免疫磁珠负性分选法能够分选出高纯度的CD8+ T细胞,并且不影响分选靶细胞的细胞活力和功能.
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单个CD8+T细胞内IFN-γ含量的测定
目的: 建立一种新的单细胞内IFN-γ的检测方法毛细管电泳免疫分析激光诱导荧光法(CEIA-LIF).方法: 选2例重型再障(sever aplastic anemia, SAA)患者及1例正常人, 用免疫磁珠法分离纯化外周血CD8+ T细胞.将其与毛地黄皂苷反应15 min, 再与FITC-抗IFN-γ单抗(mAb)反应20 min.用CEIA-LIF法进行单个细胞的连续检测, 并用倒置显微镜及激光扫描共聚焦荧光显微镜等证实本法的可行性.结果: 纯化的CD8+ T细胞内的IFN-γ, 是在不溶膜的情况下得到全部检测.2例SAA患者外周血单个CD8+ T细胞内IFN-γ的含量, 分别为(151.53±28.92)zmol和(223.72±45.23)zmol, 高出正常对照(47.47±17.97)zmol约3～4倍(P<0.01).结论: CEIA-LIF法对单个CD8+ T细胞内IFN-γ含量的测定是可行的, 有望用于临床检测.
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局部晚期鼻咽癌患者外周血淋巴细胞亚群与预后的相关性
目的 探讨外周血淋巴细胞在局部晚期鼻咽癌中的预后价值.方法 通过流式细胞术检测88例局部晚期鼻咽癌患者的外周血淋巴细胞亚群比例,比较淋巴细胞亚群在鼻咽癌不同临床特征中的差异性,采用Kaplan-Meier法和Log-rank法单因素分析淋巴细胞亚群比例对预后的影响,采用COX回归模型进行多因素预后相关分析.结果 外周血CD3+T细胞比例在鼻咽癌不同年龄组(P=0.007)、不同N分期组(P =0.043)间差异有统计学意义;外周血NK细胞比例在鼻咽癌不同年龄组(P =0.026)间差异有统计学意义.全组5 a总生存率(OS)为81.78％,5a无进展生存率(PFS)为76.51％,5a无局部复发生存率(LRFS)为90.51％,5a无远处转移生存率(MDFS)为80.09％.低CD8+T细胞比例组5 a LRFS率为84.93％,低于高CD8+T细胞比例组的100.00％,HR=5.082(1.221～21.150),差异有统计学意义(P=0.026).年龄(P =0.023)、CD8+T细胞比例(P =0.013)是局部晚期鼻咽癌5 a OS的影响因素;CD8+T细胞比例是局部晚期鼻咽癌5 a PFS的独立影响因素(P=0.030).结论 外周血淋巴细胞亚群对局部晚期鼻咽的预后有一定预测价值,尤其是CD8+T细胞比例是局部晚期鼻咽癌5aOS和5 a PFS的影响因素.
