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原核表达抖文献资料
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人疱疹病毒7型被膜蛋白pp85的原核表达及应用
目的构建人疱疹病毒7型(HHV7)被膜蛋白pp85编码基因(ORF U14)的原核表达载体,并进行原核表达.方法应用HHV7标准株Glasgow感染SupT1细胞,PCR技术扩增HHV7 ORFU14基因的主要抗原决定簇编码区(328～533 AA),目的基因与原核表达载体pThioHis A连接后,转化宿主菌E.coli BL21,IPTG诱导融合蛋白表达,经镍-螯合物琼脂糖树脂柱亲和层析纯化获得重组抗原.重组蛋白电泳后转至PVDF膜,与HHV7阳性血清进行免疫印迹反应.结果DNA序列分析表明,目的基因序列与HHV7标准毒株Glasgow相应序列完全一致,SDS-PAGE可观察到相对分子质量(Mr)为35.7×103融合蛋白的表达,免疫印迹反应显示重组抗原具有较高的特异性.结论 HHV7重组抗原具有较好的抗原性,进一步完善后可用于HHV7抗体的检测.
关键词： 人疱疹病毒7型 Western blot 被膜蛋白pp85 原核表达抖
