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人疱疹病毒7型被膜蛋白pp85的原核表达及应用
目的构建人疱疹病毒7型(HHV7)被膜蛋白pp85编码基因(ORF U14)的原核表达载体,并进行原核表达.方法应用HHV7标准株Glasgow感染SupT1细胞,PCR技术扩增HHV7 ORFU14基因的主要抗原决定簇编码区(328～533 AA),目的基因与原核表达载体pThioHis A连接后,转化宿主菌E.coli BL21,IPTG诱导融合蛋白表达,经镍-螯合物琼脂糖树脂柱亲和层析纯化获得重组抗原.重组蛋白电泳后转至PVDF膜,与HHV7阳性血清进行免疫印迹反应.结果DNA序列分析表明,目的基因序列与HHV7标准毒株Glasgow相应序列完全一致,SDS-PAGE可观察到相对分子质量(Mr)为35.7×103融合蛋白的表达,免疫印迹反应显示重组抗原具有较高的特异性.结论 HHV7重组抗原具有较好的抗原性,进一步完善后可用于HHV7抗体的检测.
关键词： 人疱疹病毒7型 Western blot 被膜蛋白pp85 原核表达抖 -
人疱疹病毒7型pp85重组表达及抗体制备
目的 制备人疱疹病毒7型(HHV-7)pp85蛋白及其抗体.方法 采用聚合酶链反应(PCR)方法自HHV-7型YY5分离株中扩增出pp85基因,经测序后构建原核表达质粒PGEX-6p-1+pp85b.重组质粒转化大肠埃希菌Rosetta,诱导蛋白表达.应用酶切鉴定、十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)及蛋白质印迹法等方法确保基因片段的正确性及表达蛋白的特异性.表达的蛋白经亲和层析纯化后,免疫动物制备多克隆抗体,并通过免疫荧光法鉴定抗体的特异性.结果 成功地获得了高纯度的pp85融合蛋白,纯度可达90%以上;免疫动物后制备的多克隆抗体效价可达1:102 400,该抗体能特异识别HHV-7抗原,而不与HHV-6反应.结论 获得高纯度的HHV-7 pp85融合蛋白及其高效价的抗体,将进一步应用于临床检验.
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酶联免疫吸附试验检测人疱疹病毒7型抗体的研究
目的 建立一种简便、快速、可靠的检测人疱疹病毒7型(HHV 7)特异性IgG和IgM酶联免疫吸附试验(ELISA).方法 应用HHV 7标准株Glasgow感染SupT1细胞,制备并纯化细胞工程抗原和重组pp85抗原;对325份血清HHV 7抗体进行检测,建立HHV 7特异性IgM和IgG间接ELISA,并与Qiagen公司ELISA试剂盒检测结果进行比较.结果 采用细胞工程抗原和重组抗原制备的HHV 7 IgG和IgM ELISA诊断试剂敏感性、特异性、稳定性及重复性[变异系数(CV)＜10%]较好;以Qiagen公司ELISA试剂盒为参比,重组抗原IgG ELISA检测上述标本的敏感性、特异性和符合率分别为98.1%、94.1%和97.8%,IgM ELISA分别为84.6%、99.7%和99.1%;与细胞工程抗原相比,重组抗原诊断试剂的特异性高而敏感性略低.结论 自制HHV 7 IgG和IgMELISA检测试剂敏感特异,可用于临床HHV 7感染的诊断及流行病学调查.
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人疱疹病毒7型感染的研究进展
人疱疹病毒7型(HHV-7),于1990年由Frenkel等首次在健康人体外周血活化CD4+T细胞中分离得到,后又在人体的血液和唾液中被分离鉴定.因其基因组与人疱疹病毒6型(HHV-6)及人巨细胞病毒(HCMV)约有75%的同源性,故将其归于β-疱疹病毒亚科.同时,HHV-6的单克隆抗体与HHV-7有一定交叉反应性.HHV-7为T淋巴细胞亲嗜性病毒,其细胞亲嗜范围较HHV-6小,常在巨噬细胞和T细胞及唾液腺细胞中潜伏存在.
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人疱疹病毒6型和7型感染与风湿性关节炎相关性的研究
[目的]探讨人疱疹病毒6型(Human herpes virus 6,HHV6)和7型(HHV7)感染与风湿性关节炎病因有无相关性.[方法]2003年采用巢式PCR技术检测40例风湿性关节炎病人和138名健康献血员外周血单个核细胞和血浆中HHV6 DNA与HHV7DNA.[结果]风湿性关节炎病人外周血单个核细胞的HHV6DNA和HHV7DNA阳性率与对照组的差异均无统计学意义(P＞0.05);部分风湿性关节炎病人血浆中可检出HHV6 DNA与HHV7 DNA,对照组则为阴性.[结论]风湿性关节炎病人中可能存在HHV6或HHV7的活动性感染,HHV6、HHV7与风湿性关节炎的发生发展有一定关系.
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肾透析患者人疱疹病毒7型感染的研究
目的检测肾透析病人外周血单个核细胞(PBMC)和血浆标本中HHV-7DNA,探讨肾透析人群中HHV-7的感染及致病作用.方法采用巢式聚合酶链反应(Nested-PCR)对50例肾透析病人和54例正常健康人PBMC和血浆标本中HHV-7DNA进行定性检测;采用限制性核酸内切酶EcoRⅠ对PCR产物进行酶切图谱分析以确定扩增产物的特异性.结果①50例肾透析病人PBMC中HHV-7DNA阳性率为82.0%(41/50),血浆中HHV-7DNA阳性率为16(8/50).②54例健康献血员PBMC中HHV-7DNA阳性率为51.8%(28/54),血浆中HHv-7DNA阳性率为0%(0/54).③统计学分析表明肾透析病人和健康人献血员PBMC标本中HHV-7阳性检出率有显著性差异X2=10.57,P＜0.05;肾透析病人血浆可检测到HHV-7DNA,而健康献血员血浆标本中HHV-7DNA阴性,二者之间具有显著性差异(X2=9.36,P＜0.05).结论①肾透析病人外周血单个核细胞和血浆中HHV-7的感染率较高,提示肾透析过程中可能存在该病毒的交叉感杂或潜伏HHV-7的激活.②巢式PCR结合限制性酶切分析是检测HHV-7感染敏感、特异和有效的方法.③部分肾透析病人血浆中可检测到HHV-7DNA,提示这些病人体内存在HHV-7的活动性感染.
