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鼠巨细胞病毒干扰神经干细胞分化相关基因表达的体外研究
目的 研究鼠巨细胞病毒(MCMV)对体外培养神经干细胞(NSCS)Wnt信号通路下游分化相关靶基因表达的影响,以探讨CMV先天感染致胎脑发育异常的分子机制.方法 体外分离培养BALB/c胎鼠NSCs,用感染复数(MOI)为5、1和0.1的MCMV Smith毒株感染NSCs并进行分化培养,Western blot法检测病毒感染后NSCs Wnt信号通路下游分化相关靶基因c-myc、cyclinD1、ngn-1、ngn-2蛋白表达水平的动态变化,real-time RT-PCR检测病毒感染后NSCs Wnt信号通路关键分化基因ngn-1 mRNA水平的动态变化.结果 感染组c-myc蛋白表达量在分化培养后第0.5～5天均显著低于正常对照组(P＜0.05);感染组cyclinD1蛋白表达量在第0 5天和1天显著低于正常对照组(P＜0 05);在第2天和3天显著高于正常对照组(P＜0.05);在第4天和5天,MOI=5组显著低于其他3组(P＜0.05);感染组ngn-1蛋白表达量在第1～5天显著低于正常对照组(P＜0 05);感染组ngn1 mRNA水平在第0 5～5天均显著低于正常对照组(P＜0.05);感染组ngn-2蛋白表达先降后升,与正常对照组先升后降相反,MOI=0.1和1组峰值后移至感染后第5天,且明显低于正常对照组峰值(P＜0.05).MOI=5组未表现出明显的峰值,各感染组ngn-2表达量在感染后1 d明显低于正常对照组(P＜0 05);感染后2 d,MOI=5组明显低于正常对照组(P＜0.05);在感染后3、4、5 d,各组ngn-2表达量又明显高于正常对照组(P＜0.05).感染组和正常对照组的差异随病毒MOI的增加而更加明显.结论 MCMV感染明显抑制NSCs Wnt信号通路分化相关基因c-myc和ngn-1蛋白表达,抑制ngn-1 mRNA表达,并诱导cyclinD1和ngn-2蛋白表达紊乱,其效应随感染滴度增加而更为显著.MCMV抑制和干扰NSCs Wnt信号通路下游分化相关靶基因表达可能是其抑制NSCs增殖分化进而导致胎脑损伤的重要作用机制之一.
