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异质性胞核核糖核蛋白A2文献资料
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异质性胞核核糖核蛋白A2基因的克隆、表达、纯化及其临床应用
目的构建含异质性胞核核糖核蛋白A2 (hnRNP A2) cDNA片段的基因克隆,制备并纯化重组蛋白hnRNP A2,用以检测抗hnRNP A2/RA33的抗体.方法从人外周血单个核细胞提取细胞总RNA,应用RT-PCR方法扩增hnRNP A2 cDNA,将其克隆于pUC-T1质粒中,测定其序列.构建高效表达载体pET28a-hnRNP A2,转化大肠杆菌BL21(DE3)plys S并进行诱导表达,将含目的蛋白的组分经金属螯合树脂亲和层析柱进行蛋白纯化.以该纯化蛋白为包被抗原,ELISA方法检测类风湿关节炎(RA) 97例、系统性红斑狼疮(SLE)50例、混合性结缔组织病(MCTD)8例、其他关节炎29例、其他弥漫性结缔组织病(CTD)99例.结果构建hnRNP A2重组表达载体并在大肠杆菌中获得hnRNP A2高效表达;在RA、SLE、MCTD、其他关节炎、其他CTD患者中抗hnRNP A2/RA33抗体阳性率分别为36.8%、24%、75%、3.75%、10.10%;在RA中特异性为86.67%.结论以纯化的基因重组蛋白hnRNP A2为抗原检测hnRNP A2/RA33抗体是早期诊断RA的可靠方法.
关键词： 异质性胞核核糖核蛋白A2 基因表达 ELISA -
异质性胞核核糖核蛋白A2在类风湿关节炎诊断中的临床意义
之间均无相关性(P>0.05).结论 我们初步纯化了RA33抗原,对hnRNP A2进行了基因的克隆、重组蛋白的表达和纯化,并以其为抗原,用ELISA方法检测抗hnRNP A2/RA33抗体是早期诊断RA的可靠方法.与国外Anti-RA33 Ab试剂盒的检测结果对比无明显差异.自制的抗RA33抗体试剂盒可以可靠地应用于临床检验.
