首页 > 文献资料
-
AllGlo探针4重荧光定量PCR技术同时检测4种疱疹病毒
目的 探讨多重荧光定量PCR技术的优化条件,建立基于AllGlo探针技术荧光定量法检测4种疱疹病毒新方法.方法 分别采用单重和多重定性PCR扩增临床常见4种疱疹病毒[单纯疱疹病毒1型(HSV-1)、HSV-2、Epstein-Barr病毒(EBV)、巨细胞病毒(CMV)]并测序鉴定,然后分别采用AllGlo探针和TaqMan探针的单重和多重定量PCR技术对4种疱疹病毒进行单种和多种病毒同时定性定量检测.结果 TaqMan探针和AllGlo探针单种疱疹病毒检测阳性率和特异性均为100％,AllGlo探针单重定量PCR检测比4重探针单种定量PCR的检测Ct值高1～3,AllGlo探针4重定量PCR可以同时检测4种疱疹病毒,相同样品AllGlo探针4重定量PCR检测与单探针单重定量PCR分别检测的结果符合率100％.结论 AllGlo探针荧光定量PCR技术的通量、灵敏度和特异性均高于TaqMan探针,应用前景广阔.
-
GⅠ和GⅡ型诺如病毒双重荧光RT-PCR法检测
目的 建立应用Allglo探针同时检测GⅠ和GⅡ型诺如病毒的双重荧光反转录\聚合酶链反应(RT-PCR)方法.方法 设计针对GⅠ和GⅡ型诺如病毒开放阅读框架ORF1及ORF2为目的基因的引物和Allglo探针,优化佳反应条件,建立一步法荧光RT-PCR快速检测反应体系；对该方法的特异性、抗干扰性、灵敏度进行评估,对96份临床粪便标本进行检测、测序分析.结果 该方法特异性强,与轮状病毒、扎如病毒、星状病毒、腺病毒同时检测无交叉反应；同一体系下GⅠ或GⅢ型诺如病毒相互之间没有干扰；低检测限均为10 copies/μL；对96份临床粪便标本进行检测,结果与单重荧光RT-PCR方法符合率100％,且测序结果显示目标序列正确.结论 本研究建立的Allglo探针法检测GⅠ和G Ⅱ型诺如病毒技术特异性好,灵敏度高,可用于感染性腹泻暴发中诺如病毒的快速筛查.
-
基于AllGlo探针的双重实时荧光定量PCR法检测高危型人乳头瘤病毒HPV16/18
目的 建立基于AllGlo探针的双重实时荧光定量PCR检测高危型人乳头瘤病毒HPV16/18的方法.方法 针对HPV16/18病毒基因组保守序列,设计引物和AllGlo探针,建立双重荧光定量PCR检测方法,评价其敏感性、特异性和稳定性,并与传统HC2方法比较.结果 成功建立了双重实时荧光定量PCR检测HPV16/18的方法,检测限均为10 copies/μL,敏感性和特异性均为100％.应用该方法检测160份宫颈肿瘤患者样本,与传统HC2法结果一致性为100％.结论 该研究建立的快速、准确、可同时检测HPV16/18的双重实时荧光定量PCR法,具有较高的敏感性、特异性和稳定性,操作简单,可用于HPV16/18的临床筛查和诊断.
-
AllGlo探针Real-time RT-PCR检测发热伴血小板减少综合征病毒
目的 建立基于AllGlo探针Real-time RT-PCR技术检测发热伴血小板减少综合征病毒(SFTSV)的方法.方法 根据SFTSV基因组S片段的相对保守序列设计引物和AllGlo探针,建立和优化Real-time RT-PCR反应体系,对其敏感性、特异性和稳定性进行评价,并检测临床疑似SFTSV病例标本,与普通RT-PCR法、病毒分离法和抗体检测法进行比较.结果 所建立AllGlo探针Real-time RT-PCR法检测SFTSV核酸,标准曲线方程为y=-3.38x +46.03(y为Ct值,x为核酸拷贝数10g值),r2＞0.998,扩增效率为97.6％,Ct值变异系数(CV)均＜1.2％,检测限为1.00×103 copy/mL.与汉坦病毒、H1N1、H3N2、登革病毒1～4型均无交叉.检测362份疑似病例标本,SFTSV核酸阳性检出率11.9％,高于普通RT-PCR法、病毒分离法和抗体检测法(P值均＜0.05).结论 建立的AllGlo探针Real-time RT-PCR法,操作简单、快速,灵敏性、特异性较高,可用于SFTSV核酸检测.
-
致病性大肠埃希菌毒素基因的Allglo探针技术鉴定
目的：基于Allglo探针技术结合多重荧光PCR，建立快速、简便鉴定致病性大肠埃希菌相关毒素基因的方法。方法选取致病性大肠埃希菌的紧密黏附素基因（ eae）、志贺样毒素Ⅰ基因（ stx I）、志贺样毒素II基因（ stx II）和转录激活因子基因（ aggR）作为靶点。通过设计引物和Allglo探针，建立多重荧光PCR反应体系。同时，构建了4种毒素基因标准质粒，进而评价方法的特异性、灵敏性和重复性。结果基于Allglo探针技术的多重荧光PCR方法可同时准确、特异地鉴定致病性大肠埃希菌所携带的4种毒素相关基因，eae基因和aggR基因的灵敏度为10 copies/μL，stx I基因和stx II基因的灵敏度为1 copies/μL；定量检测的批间和批内变异系数均小于5%。对356份腹泻粪便样本进行评价，结果显示检出39份基因阳性。39份阳性样本中，eae基因阳性为53.85%，stxⅠ基因和stx II基因阳性为23.08%，aggR基因阳性为46.15%。通过直接测序方法进行鉴定，符合率达到100.00%。结论本实验建立的基于Allglo探针技术结合多重荧光PCR方法具有操作简便、特异性好和灵敏度高等特点，为致病性大肠埃希菌鉴定提供了一种快速、可靠的检测方法。
-
Allglo探针与Taqman探针双重荧光RT-PCR法检测GⅠ型和GⅡ型诺如病毒的比较和应用
目的 对Allglo探针和Taqman探针检测GⅠ型和GⅡ型诺如病毒的双重荧光RT-PCR方法进行比较,并应用于临床标本的检测.方法 设计针对GⅠ型和GⅡ型诺如病毒的Allglo探针和Taqman探针,优化佳反应条件,建立一步法荧光RT-PCR快速检测反应体系.对这两种方法的特异性、灵敏度进行比较评估,对56份临床粪便标本进行检测,并统计结果.结果 这两种方法特异性强;低检测限均为102 copies/μL以下;但是Allglo探针在同一浓度下比Taqman探针CT值更低,扩增效率更高.对56份临床粪便标本进行检测,两种方法结果一致.结论 Allglo探针双重荧光RT-PCR方法较之Taqman探针检测GⅠ型和GⅡ型诺如病毒扩增效率更高,两者均可用于感染性腹泻暴发中诺如病毒的快速筛查.
关键词： AllGlo探针 TaqMan探针 GⅠ型和GⅡ型诺如病毒 -
Allglo探针与TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测猴免疫缺陷病毒的比较
目的 比较Anglo探针和TaqMan探针荧光定量RT-PCR检测SIV的灵敏度下限和重复性.方法 把SIV标准品进行梯度稀释成6个浓度,每个浓度同时提取12个标本进行批内差异分析,每个标本提取12次进行批间差异分析之后进行逆转录并用TaqMan探针和Anglo探针进行定量PCR检测.批内差异分析者每个标本同时进行逆转录和上机检测,批间差异分析者分12次进行逆转录和检测,对这两种探针的PCR结果利用ABI7300定量PCR仪所携带的软件和相关的统计学方法进行分析.结果 TaqMan探针和Anglo探针法检测SIV标准品的灵敏度下限均为50 copies/mL.重复性结果显示:批内结果差异分析显示Anglo探针法大变异系数为0.63％,小变异系数为0.33％,TaqMan探针法大变异系数为1.33％,小变异系数为0.2％;批间结果差异分析显示Allglo探针法大变异系数为1.77％,小变异系数为0.95％,TaqMan探针法大变异系数为1.86％,小变异系数为1.03％.结论 在荧光定量RT-PCR法检测猴免疫缺陷病毒中,Anglo探针法可能优于TaqMan探针法.
