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非磷脂脂质体介导反义c-myc基因质粒转染对人脑胶质瘤细胞U251的影响
目的确定非磷脂脂质体(non-phospholipid liposome, NPL)介导反义c-myc基因转染人脑胶质瘤(glioma)的作用. 方法以金属离子诱导表达人反义c-myc基因的质粒pHMTASCMH DNA与NPL结合转染人脑恶性胶质瘤细胞U251,转染6?h后加入200μmol/L ZnCl2作实验组,不加ZnCl2转染细胞和单用NPL为对照组.在实验的第24、48、72和96?h分别测定细胞还原四甲基偶氮唑盐(MTT)的光吸收值.将实验第24小时或72小时的细胞分别进行annexin-V-FLUOS或TUNEL染色;细胞裂解后做ELISA检测c-myc基因表达产物含量的变化. 结果显微镜下观察转染48?h实验组瘤细胞开始出现多角型细胞,细胞胞浆内产生空泡;MTT实验结果发现其细胞活性下降;annexin-V-FLUOS染色与TUNEL实验显示细胞出现明显的程序性细胞死亡特征;c-myc基因表达产物下降. 结论非磷脂脂质体介导反义c-myc基因转染脑胶质瘤细胞可特异性地抑制c-myc基因表达,抑制瘤细胞生长,细胞活性下降,乃至出现程序性细胞死亡.
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包裹天然骨架CpG ODN和HBsAg的非磷脂脂质体疫苗的免疫效果
非磷脂脂质体Novasome(R) (Np)是由Brij52、胆固醇和油酸组成,可作为同时传递佐剂和抗原的载体.我们将HBsAg与天然骨架CpG ODN (phosphodiester CpG ODN,pdCpG ODN)包裹于Np后免疫BALB/c小鼠,检测其免疫效果.结果显示,包裹pdCpG ODN和HBsAg的Np在小鼠中诱导了很高滴度的抗-HBs抗体产生并诱生了HBsAg S28-39特异性的CTL,而铝佐剂组和仅包裹HBsAg的Np组诱生的抗体滴度较低,未检测到CTL活力.抗体亚类分析结果表明包裹pdCpG ODN和HBsAg的Np诱生的免疫应答类型与pdCpG ODN剂量有关,较低剂量(24 μg pdCpG ODN)诱生的为IgG2a为主的Th1型应答,而较高剂量(47 μg pdCpG ODN)诱生的是Th1/Th2混合型应答.铝佐剂和仅包裹HBsAg的Np组诱生的是以IgG1为主的Th2型应答.此外,包裹pdCpG ODN和HBsAg的Np免疫小鼠脾淋巴细胞在体外HBsAg刺激培养后特异性增殖并分泌高水平的IFN-γ.这些结果表明包裹pdCpG ODN和HBsAg的Np能增强HBsAg的免疫原性,诱生体液/细胞免疫均衡应答,有可能发展为慢性乙肝的治疗性疫苗.
关键词： 乙肝表面抗原 非磷脂脂质体 天然骨架CpG ODN -
破伤风类毒素非磷脂脂质体疫苗的实验研究
以二氧乙烯十六烷醚、胆固醇和油酸为原料制备非磷脂脂质体,试验证明其包裹率高、稳定性好.与破伤风类毒素(TT)铝佐剂疫苗相比较,TT非磷脂脂质体疫苗二针免疫小鼠产生的抗体应答水平高一倍左右,抗体亚类以IgG1为主,加入IFN-γ可增加IgG2aI亚类应答.但免疫脾细胞IL-2产量不高.此外,该疫苗鼻粘膜接种可诱导显著的血清抗体应答.因而这种新型脂质体值得疫苗工作者重视.
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非磷脂脂质体佐剂在免疫血清制备中的应用研究
目的研究非磷脂脂质体在免疫血清制备中的佐剂效应.方法用无菌人血清、人血清+完全福氏佐剂(CFA)、人血清+非磷脂脂质体(NPL)分别经背部皮下多点注射免疫家兔制备免疫血清,采用双向免疫扩散和ELISA间接法检测免疫血清抗体效价.结果①人血清+CFA组和人血清+NPL组血清抗体效价均明显高于无菌人血清组;②在免疫血清的制备中NPL的佐剂作用与CFA的作用相当,但其毒性作用明显低于CFA.结论在免疫血清制备中,NPL佐剂可以代替CFA.
