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应用噬菌体肽文库筛选McAb F3特异性结合肽
目的应用噬菌体展示肽文库筛选可与抗汉坦病毒囊膜蛋白单抗F3特异性结合的配体肽. 方法采用protein-A亲和层析纯化的F3 单抗为筛选配基,对噬菌体展示的随机12肽文库进行生物亲和淘洗;夹心ELISA、竞争ELISA鉴定筛选克隆的结合特性,并进一步对阳性克隆进行序列测定和分析. 结果通过3轮生物淘洗,能被抗体捕获的噬菌体克隆为91.7%(11/12);ELISA测定显示筛选到的噬菌体短肽能与F3单抗特异性结合;序列分析表明7个阳性克隆氨基酸序列相同,均为-MHGPTKNQMWHT,同源性分析显示该序列与HTNV/SEOV M蛋白G2区第750～759位氨基酸有较高的同源性. 结论获得了具有良好结合活性的模拟表位肽,为基于表位水平的HFRSV(肾病综合征出血热病毒)特异性分子多肽疫苗的设计提供了重要依据.
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应用噬菌体肽文库筛选肾综合征出血热病毒优势B细胞结合表位肽
目的:应用噬菌体展示肽文库筛选鉴定肾综合征出血热病毒优势B细胞结合表位肽. 方法:以Protein-A纯化的肾综合征出血热患者恢复期血清为筛选配基,对经正常人血清预吸附的噬菌体展示随机12肽文库(或次级肽文库)进行生物亲和淘选;夹心ELISA、竞争ELISA鉴定所获得克隆的结合特性,并进一步对阳性克隆进行序列测定和分析. 结果:ELISA测定显示,通过5轮淘选得到的噬菌体克隆半数以上可与筛选血清发生特异性结合;对45个阳性克隆进行序列测定分析,根据其推导的氨基酸序列可大致分为8组,同源性分析显示,Ⅰ～Ⅶ组序列基序可能为LVXKR、LTXR、IXKP、LXPA、VGA、KXlR、EKXP,其中4组基序在病毒结构蛋白氨基酸序列中发现同源区. 结论:获得了一组肾综合征出血热病毒(HFRSV)优势B细胞表位肽,HFRSV核蛋白可能是诱导高水平抗体的主要免疫原,研究结果为基于表位的基因工程诊断试剂的研制和多肽疫苗的设计提供依据.
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汉坦病毒核衣壳蛋白mAb B11模拟结合肽的筛选和鉴定
目的应用噬菌体展示肽文库筛选可与肾综合征出血热病毒mAb B11特异性结合的短肽.方法采用Protein-A亲和纯化的单抗为筛选配基,对噬菌体展示的随机12肽文库进行生物亲和淘选;夹心ELISA、竞争ELISA鉴定筛选克隆的结合特性,并进一步对阳性克隆进行序列测定和分析.结果通过4轮淘选,ELISA测定显示筛选到的噬菌体短肽多数能与B11单抗特异性地结合(12/15);序列分析表明8个阳性克隆氨基酸序列分为4组;同源性分析显示核心序列可能为(M/F)HR(H/T)X(H/W)或(R/F)HX(H/T)P(W/M)(L/Y).结论基于表位水平的HFRSV特异性诊断试剂的研制和小分子多肽疫苗的设计提供了重要依据.
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应用噬菌体肽文库筛选mAb F3特异性结合肽
目的应用噬菌体展示肽文库筛选可与汉坦病毒囊膜蛋白中和性单抗(mAb) F3特异性结合的配体肽. 方法以F3 mAb为筛选配基, 对噬菌体展示的随机12肽文库进行3轮生物亲和淘选; 用夹心ELISA和竞争ELISA鉴定筛选克隆的结合特性, 并进一步对阳性克隆进行序列测定和分析.结果通过3轮生物淘选, 能被抗体捕获的噬菌体克隆为21/22. ELISA测定显示, 筛选到的噬菌体短肽能与F3 mAb特异性结合. 序列分析表明, 7个阳性克隆氨基酸序列相同, 均为-MHGPTKNQMWHT; 同源性分析显示, 该序列与HTNV/SEOV M蛋白G2区第750～759位氨基酸有较高的同源性.结论本研究为基于表位水平的HFRSV特异性分子多肽疫苗的设计提供了重要的依据.
