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卡介苗胞壁蛋白诱导人肺腺上皮细胞hBD-1mRNA表达及其抗菌活性的增强
目的分离和鉴定刺激人肺腺上皮细胞(SPC-A-1) β-防御素-1 (hBD-1)基因表达的卡介苗胞壁活性蛋白，开发增强粘膜抗菌肽基因表达的免疫增强剂为防治粘膜感染的研究打基础。方法采用超声破碎细胞、蔗糖密度梯度离心、Sephadex G-150柱层析等方法分离卡介苗胞壁蛋白质组分；应用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）法和Northern杂交检测SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的表达；采用琼脂糖弥散杀菌法检测SPC-A-1细胞培养上清的抗菌活性。结果利用RT-PCR和Northern杂交分析，证实卡介苗刺激SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的表达增强了2倍。卡介苗胞壁蛋白Sephadex G-150层析所得6个组分中，组分5［相对分子质量（Mr）范围在21×103～29×103］诱导SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的表达增强4倍，其培养上清的抗菌活性显著增强。这种诱导作用具剂量和时间依赖关系。结论卡介苗能增强人肺腺上皮SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的表达及其抗菌活性；Mr为21×103～29×103的胞壁蛋白组分起这种刺激作用。
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β-防御素在声带息肉中的表达及意义
目的 探讨人类β-防御素1(human beta-defensin 1,hBD～1)、人类β-防御素2(human beta-defensin 2,hBD-2)在声带息肉组织中的表达及意义.方法 采用组织芯片技术制作包括声带息肉组、声带小结组以及对照组(正常声带组织)标本的组织芯片.利用S-P免疫组织化学染色法检测hBD-1、hBD-2在各组的表达情况.结果 hBD-1在声带息肉、声带小结及对照组中均为低强度表达,且三组间差异无统计学意义(P>0.05);hBD-2在声带小结组和对照组中仅有微弱表达,而在声带息肉组中表达明显增强(P<0.05).结论 hBD-1和hBD-2在声带上皮中分别为固有性表达和诱导性表达,这表明声带上皮在机体细胞和体液免疫尚未发生作用之前.即可通过分泌β-防御素及时、有效地杀灭外来病原菌,在早期炎症反应中发挥天然防御作用.
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反复肺炎婴幼儿血清β-防御素-1和免疫球蛋白A、G、M水平的研究
目的 通过检测反复肺炎婴幼儿和健康婴幼儿血清中β-防御素-1 (hBD-1)和免疫球蛋白A(IgA)、免疫球蛋白G(IgG)、免疫球蛋白M(IgM)浓度,探讨hBD-1和IgA、IgG、IgM在反复肺炎发病中的可能作用.方法 收集35例2～24月龄反复肺炎和35例健康婴幼儿的血清,处理后应用酶联免疫吸附法(ELISA)检测血清中hBD-1浓度,应用免疫比浊法测定血清IgA、IgG、IgM浓度,并分析血清hBD-1与IgA、IgG、IgM之间的相关性.结果 反复肺炎组血清hBD-1浓度为14±11μg/mL,显著低于健康对照组(18±11μg/mL),差异有统计学意义(P＜0.05).反复肺炎组血清IgA浓度为1.3±0.6 g/L,显著低于健康对照组(1.5±0.8 g/L),差异有统计学意义(P＜0.05).反复肺炎组血清IgG浓度为9±3g/L,亦显著低于健康对照组(13±5 g/L),差异有统计学意义(P＜0.05).血清hBD-1与IgA、IgG、IgM之间不存在线性相关关系(P＞0.05).结论 反复肺炎婴幼儿存在血清hBD-1、IgA、IgG水平低下的现象,提示呼吸道免疫防御功能存在障碍,这可能是婴幼儿反复肺炎的免疫因素之一；对反复肺炎婴幼儿同时检测hBD-1、IgA、IgG、IgM具有重要的临床意义.
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小鼠β-防御素-1的对Hek293细胞迁移的作用
目的 观察经原核表达得到的小鼠β-防御素-1(mBD-1)对Hek293细胞中CCR6-CCL20通路的影响以及对促进Hek293细胞趋化移动的情况.方法 用定量PCR方法检测CCR6和CCL20的基因表达情况,同时用Transwell小室研究其对Hek293细胞的定向移动作用.结果 mBD-1可以使CCR6的表达量增加,且mBD-1浓度越高时CCR6表达量越高,差异有统计学意义(P＜0.05).CCL20的表达量不随mBD-1浓度的升高而变化.同时mBD-1可以促进Hek293细胞作定向移动.结论 本研究为进一步研究mBD-1对细胞的免疫诱导机制奠定基础.
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β-防御素-1mRNA在大鼠体内的分布及基因顺序分析
目的 研究β-防御素-1mRNA在正常大鼠体内的存在情况和基因顺序情况,为临床调节和应用β-防御素-1提供重要的信息.方法 从大鼠不同器官和组织的匀浆中提取总RNA,合成第1链cDNA,利用PCR扩增大鼠β-防御素-1的DNA片段,PCR产物经凝胶电泳后观察并测序.结果 遍及全身的21种器官和组织中,气管、心脏、肾脏、子宫、卵巢、睾丸、肝脏、胃、小肠、胸腺、脑和皮肤等12种器官或组织中能检测到β-防御素-1的mRNA,其中,在气管、心脏、肾脏、胃、卵巢和皮肤中较为丰富.DNA测序确定PCR产物为防御素,且与已知的防御素结构完全一致.结论 β-防御素-1的mRNA在正常大鼠体内多个器官和组织中都存在,提示它在机体内控制细菌感染的作用较为广泛,它的结构高度保留.
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卡介苗吸入对LPS致肺炎大鼠肺β-防御素mRNA的影响
目的 探讨卡介苗(BCG)雾化吸入是否能增强肺炎大鼠活体内肺组织β-防御素-1、β-防御素-2的mRNA表达.方法 采用RT-PCR方法 研究肺炎时大鼠活体内β-防御素-1(RBD-1)、β-防御素-2(RBD-2)mRNA的表达,卡介苗雾化吸入时脂多糖所致肺炎大鼠活体内的肺组织RBD-1、RBD-2mRNA的表达.结果 脂多糖(LPS)、卡介苗不能增强下呼吸道RBD-1mRNA的表达,但可增强RBD-2mRNA表达.结论 通过卡介苗雾化吸入能增强机体表达内源性β-防御素-2,协助治疗呼吸道感染,其在诱导β-防御素方面的作用是一个值得进一步探索的研究领域.
