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卡介苗胞壁蛋白诱导人肺腺上皮细胞hBD-1mRNA表达及其抗菌活性的增强
目的分离和鉴定刺激人肺腺上皮细胞(SPC-A-1) β-防御素-1 (hBD-1)基因表达的卡介苗胞壁活性蛋白,开发增强粘膜抗菌肽基因表达的免疫增强剂为防治粘膜感染的研究打基础。方法采用超声破碎细胞、蔗糖密度梯度离心、Sephadex G-150柱层析等方法分离卡介苗胞壁蛋白质组分;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Northern杂交检测SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的表达;采用琼脂糖弥散杀菌法检测SPC-A-1细胞培养上清的抗菌活性。结果利用RT-PCR和Northern杂交分析,证实卡介苗刺激SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的表达增强了2倍。卡介苗胞壁蛋白Sephadex G-150层析所得6个组分中,组分5[相对分子质量(Mr)范围在21×103~29×103]诱导SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的表达增强4倍,其培养上清的抗菌活性显著增强。这种诱导作用具剂量和时间依赖关系。结论卡介苗能增强人肺腺上皮SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的表达及其抗菌活性;Mr为21×103~29×103的胞壁蛋白组分起这种刺激作用。
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鱼腥草注射液诱导人肺腺上皮细胞β防御素2 mRNA表达
目的:探讨鱼腥草注射液体外刺激人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)后人β防御素2(human beta-defensin 2,HBD-2)基因表达的情况,并研究HBD-2表达对鱼腥草注射液浓度和作用时间的依赖效应.方法:体外培养SPC-A-l细胞,设置12.5、25、50、100和200μg/ml 5个鱼腥草注射液浓度梯度,刺激贴壁生长的SPC-A-l细胞8 h,根据细胞HBD-2 mRNA表达量明确作用佳的浓度;佳作用浓度鱼腥草注射液作用0、1、2、4、8、16、24和48 h,根据细胞HBD-2 mRNA表达量明确佳作用时间.SPC-A-l细胞HBD-2mRNA表达的情况应用逆转录聚合酶链式反应技术检测.结果:不同浓度鱼腥草注射液刺激SPC-A-1细胞后,HBD-2表达与刺激剂量(rs=0.829,P=0.042)和刺激时间(rs=0.914,P=0.003)具有一定的相关性,当鱼腥草浓度为100 μg/ml、刺激8 h时,HBD-2 mRNA表达水平达到高.与空白对照组和白细胞介素1β对照组比较,100 μg/ml鱼腥草注射液作用8 h可以上调SPC-A-l细胞HBD-2 mRNA的表达.结论:鱼腥草注射液可诱导HBD-2基因的表达增强,佳浓度为100 μg/ml,佳刺激时间为8 h.
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卡介苗增强人肺腺上皮细胞β-防御素-1基因的转录
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卡介苗增强人肺腺上皮细胞Fall-39 mRNA表达及其抗菌活性
目的:Fall-39是Cathelicidine家庭中唯一存在人体内的抗菌肽,具有广谱抗菌活性和细胞毒性,对天然免疫与获得性免疫均发挥作用,因此在抗生素肽开发领域日益受到重视,本研究观察卡介苗能否增强人肺腺上皮细胞表达Fall-39.方法:根据GenBank中人Fall-39的cDNA序列资料,设计特异性引物,应用RT-PCR的方法检测mRNA的表达.超声击粹、蔗糖密度梯度离心及SDS抽提等步聚提取卡介苗胞膜蛋白,Sephadex G-75柱层析粗分其不同分子量蛋白.结果:卡介苗的确可刺激人肺腺上皮细胞Fall-39 mRNA的增强表达,这种增强表达具刺激物剂量和时间依赖性.BCG 100 mg/L刺激8 h时,Fall-39 mRNA表达量达到高.BCG胞壁蛋白经Sephadex G-75柱层析,获得的组分4(分子量范围约2.1-2.9 kD)刺激SPC-A-1细胞后Fall-39 mRNA的表达增强了8.5倍.培养细胞上清抗菌试验显示被刺激细胞培养上清的抗菌活性亦明显增强.结论:结果提示除细菌LPS外,BCG胞壁蛋白亦是Fall-39基因的激活因子,可诱导其基因的上调表达.
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卡介苗胞壁蛋白诱导人肺腺上皮细胞hBD-1 mRNA表达及其抗菌活性的增强
目的:旨在分离和鉴定刺激人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)β-防御素-1(hBD-1)基因表达的卡介苗胞壁活性蛋白,为开发增强粘膜抗菌肽基因表达的免疫增强剂以防治粘膜感染的研究打下基础.方法:采用超声破碎细胞、蔗糖密度梯度离心、Sephadex G-150柱层析等方法分离卡介苗胞壁蛋白质组份;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和Northern杂交检测SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的表达;采用琼脂糖弥散杀菌法检测SPC-A-1细胞培养上清的抗菌活性.结果:RT-PCR和Northern杂交分析均证实卡介苗刺激SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的表达增强了2倍.卡介苗胞壁蛋白Sephadex G-150层析所得6个组分中,组分5(分子量范围约21×104-29×104)诱导SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的表达增强4倍,其培养上清的抗菌活性显著增强.这种诱导作用具剂量和时间依赖关系.结论:结果提示卡介苗胞壁蛋白是β-防御素基因诱导表达的一新的激活因子.
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诱导人肺腺上皮细胞hBD-1基因表达的BCG胞壁蛋白
目的:分离和鉴定增强人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)抗菌活性核β-防御素-1(hBD-1)基因表达的菌种及其有效成份,为开发增强粘膜抗菌肽基因表达的免疫增强剂以防治粘膜感染的研究打下基础.方法:采用超声波破碎细胞、蔗糖密度梯度离心、Sephadex G-150柱层析等方法分离卡介苗胞壁蛋白质组份;采用琼脂糖弥散杀菌法检测SPC-A-1细胞培养上清的抗菌活性;应用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法和North-em杂交检测SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的表达.
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卡介苗胞壁蛋白增强人肺腺上皮细胞hBD-1mRNA的表达及抗菌活性
目的:分离和鉴定增强人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)抗菌活性核β-防御素-1(hBD-1)基因表达的菌种及其有效成份,为开发增强粘膜抗菌肽基因表达的免疫增强剂以防治粘膜感染的研究打下基础.方法:采用超声波破碎细胞、蔗糖密度梯度离心、SephadesG-150柱层析等方法分离卡介苗胞壁蛋白质组份:采用琼脂糖弥散杀菌法检测SPC-A-1细胞培养上清的抗菌性;应用逆转录聚合酶链反庆(RT-PCR)法和Northern杂交检测SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的表达.结果:利用RT-PCR和Northern杂交分析,证实了卡介苗诱导SPC-A-1细胞hBD-1 mRNA的2倍增强表达.
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卡介苗增强人肺腺上皮细胞β-防御素-1基因的转录
目的:检测卡介苗(BCG)胞壁蛋白对人β-防御素-1(hBD-1)基因表达的影响,并初步分析该基因5′-端旁侧区中的BCG作用元件. 方法:经Sephadex G-150层析柱分离得到BCG细胞壁蛋白组份.用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)和Northern杂交分析法检测hBD-1 mRNA在肺腺上皮细胞的表达.
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香菇多糖诱导人肺腺上皮细胞β-防御素-2基因表达的研究
探讨香菇多糖诱导人肺腺上皮细胞的人-β-防御素-2(HBD-2)基因表达的情况.香菇多糖体外刺激人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)后,应用RT-PCR技术检测SPC-A-1细胞HBD-2 mRNA的表达.香菇多糖可上调人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)HBD-2mRNA的表达;这种增强表达与药物的刺激剂量和刺激时间具有一定的相关性.
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卡介苗对人肺腺上皮细胞表达Fall-39 mRNA及抗菌活性的影响
目的探讨卡介苗能否增强Fall-39在人肺腺上皮SPC-A-1细胞中的表达,分离鉴定卡介苗刺激作用的有效胞壁蛋白组份,并检测其抗菌活性.方法根据GenBank中人Fall-39的cDNA序列资料,设计特异性引物,应用RT-PCR法检测SPC-A-1 细胞Fall-39 mRNA的表达,采用超声破碎细胞、蔗糖密度梯度离心、Sephadex G-75柱层析等方法分离卡介苗胞壁蛋白质组份;采用琼脂糖弥散杀菌法检测SPC-A-1细胞培养上清的抗菌活性.结果卡介苗刺激SPC-A-1细胞Fall-39 mRNA的表达明显增强,而且这种诱导增强表达在一定范围内具有刺激物剂量和时间依赖性.卡介苗胞壁蛋白层析所得6个组份中,组份4(相对分子质量范围约21~29×103)诱导SPC-A-1细胞Fall-39 mRNA的表达增强约8.5倍,其培养上清的抗菌活性显著增强.结论BCG胞壁蛋白是Fall-39基因的激活因子,可诱导其基因的上调表达.
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炎症信号受体Toll基因在人肺腺上皮细胞和血管内皮细胞的表达
目的研究炎症信号受体TollmRNA在人单核吞噬细胞系(THP-1)、脐静脉血管内皮细胞(UVECs)和肺腺上皮细胞系(SPC-A-1)的表达情况.方法分别设计人TLR2和TLR4两对特异引物,从THP-1、UVECs和SPC-A-1提取总RNA,采用一步法RT-PCR和地高辛标记的Northern杂交技术检测TLR2和TLR4在3种细胞的表达.结果RT-PCR和Northern杂交显示,3种细胞均表达TLR4受体,但仅THP-1和人UVECs表达TLR2受体.结论本实验结果表明除单核吞噬细胞外,大血管内皮细胞和肺腺上皮细胞亦表达Toll受体基因,提示在炎症反应中Toll信号受体可能介导这些细胞效应分子基因转录激活的信号传导.
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板蓝根诱导人肺腺上皮细胞β-防御素-2基因表达的研究
目的 研究板蓝根体外刺激人肺腺上皮细胞(SPC-A-1)是否诱导表达具有抗菌活性的人-β-防御素-2(HBD-2)表达,并进一步探讨该表达是否存在浓度和时间依赖性效应,为进一步在动物水平探讨HBD-2的表达与中药之间的量效关系及时效关系提供依据.方法 体外培养SPC-A-1细胞,设置板蓝根5个浓度梯度,另设阳性对照和空白对照各1个,分别刺激贴壁生长的SPC-A-1细胞,应用RT-PCR技术检测SPC-A-1细胞HBD-2mRNA的表达情况,获取佳表达浓度;再以佳浓度经不同时间点刺激SPC-A-1细胞,得到表达诱导时间和持续时间.结果 研究显示板蓝根能够上调(SPC-A-1)细胞HBD-2mRNA的表达,且这种表达与板蓝根具有浓度和时间依赖性,当浓度为100μg/ml,刺激8h时,HBD-2mRNA的表达达到高.结论 板蓝根可诱导HBD-2基因的表达,当浓度为100μg/ml,刺激8h时,其表达达到高.