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血必净注射液经肌醇需求酶1α信号通路影响组织因子凝血活性
目的 探讨不同浓度血必净注射液对内毒素诱导大鼠内皮细胞组织因子(tissue factor,TF)凝血活性的影响.方法 随机将内皮细胞分为对照组、脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)组(500 ng/mL)、血必净组(1、5、25μL/mL)、LPS+血必净组(1、5、25μL/mL),培养24、48和72 h后采用CCK-8法检测细胞增殖;留取上清,检测乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)释放量;以刺激72 h为观察点,采用Western blot技术检测肌醇需求酶1α(inositol-requiring enzyme 1α,IRE1 α)、未剪接型X盒结合蛋白(unspliced-box binding protein-1,uXBP-1)、剪接型X盒结合蛋白(spliced-box binding protein-1,sXBP-1)及蛋白质二硫化物异构酶(protein disulfide isomerase,PDI)的表达水平;加入Ca2+、凝血因子(coagulation factor,F)Ⅶ和F Ⅹ,用发色底物法检测活化FⅩa水平.结果 与对照组相比,LPS组细胞增殖能力下降,LDH释放增多(P＜0.05),IRE1 d、uXBP1、sXBP1、PDI表达均上调,差异具有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,血必净组细胞增殖能力增强,LDH释放减少(P＜0.05或P＜0.01),随着时间增加,此效应逐渐增强;LPS+血必净组较LPS组细胞增殖活性升高,LDH释放下降(P＜0.05或P＜0.01),RE1α、uXBP1、sXBP1和PDI表达均明显减弱(P＜0.01),FXa产生随IRE1α、XBP1、PDI表达水平降低而减少(P＜0.05),其中LPS+5μL/mL血必净组降低F Ⅹ a效果尤为明显(P＜0.05).结论 血必净注射液能通过阻断IRE1α-XBP1通路,降低PDI的表达,影响内皮细胞TF凝血活性.
关键词： 脓毒症 肌醇需求酶1α 蛋白质二硫化物异构酶 活化凝血因子Ⅹ 组织因子 -
低剂量辐射诱导小鼠睾丸细胞中IRE1α和XBP1 mRNA及其蛋白的表达
目的:检测小鼠睾丸细胞中肌醇需求酶1α (IRE1α)和X盒结合蛋白1(XBP1) mRNA和蛋白的表达,探讨IRE1-XBP1通路激活在低剂量辐射(LDR)诱导小鼠睾丸细胞内质网应激中的作用.方法:50只健康雄性ICR小鼠,随机分为10组,经75 mGy X射线全身照射后不同时间(0、3、6、12和24 h)及不同剂量(0、50、75、100和200 mGy)X射线照射后12 h处死,分别采用实时定量PCR法和Western blotting法检测小鼠睾丸细胞中IRE1α、Total-XBP1 (T-XBP1)和Spliced-XBP1 (S-XBP1) mRNA表达水平及蛋白表达强度.结果:75 mGy X射线照射后0～24 h,小鼠睾丸细胞中IRE1α、T-XBP1和S-XBP1 mRNA(除了3h时T-XBP1和S-XBP1 mRNA)表达水平均随时间延长而升高,并在6h时达到峰值,而后逐渐降低;与0h组比较,6、12和24 h组IRE1α mRNA、6和12 h组T-XBP1 mRNA及S-XBP1 mRNA表达水平均明显升高(P＜0.05或P＜0.01).与0h组比较,不同时间组IRE1α和S-XBP1蛋白表达强度升高,6和12 h组IRE1α蛋白表达强度升高明显,24 h组S-XBP1蛋白表达强度升高明显,而T-XBP1蛋白表达强度稍有降低.0～200 mGy照射后12 h,小鼠睾丸细胞中IRE1α、T-XBP1和S-XBP1 mRNA表达水平升高,75 mGy X射线照射后升高达峰值后逐渐降低,甚至降至0 mGy以下;与0 mGy组比较,75和200 mGy组小鼠睾丸细胞中IRE1α、75 mGy组小鼠睾丸细胞中T-XBP1和S-XBP1 mRNA表达水平明显升高(P＜0.05或P＜0.01).与0 mGy组比较,75 mGy组IRE1α和S-XBP1蛋白表达强度升高,75和200 mGy组小鼠睾丸细胞中S-XBP1蛋白表达强度升高明显,而T-XBP1蛋白表达强度无明显变化.结论:LDR可诱导小鼠睾丸细胞中IRE1α和S-XBP1 mRNA表达水平和蛋白表达强度增加,从而激活内质网应激中的IRE1-XBP1信号通路.
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维甲酸诱导基因I在DSS诱导的慢性肠炎小鼠结肠组织中的表达
目的:探讨维甲酸诱导基因I(RIG-I)在葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠慢性结肠炎中的表达及意义.方法:选择健康清洁级8～10周龄C57BL/6雌性小鼠,随机分为对照组(n=8,正常饮用无菌蒸馏水)和慢性炎症组(n=8),先给予10 g/L DSS溶液自由饮用7 d,然后正常饮用无菌蒸馏水14 d作为1个周期,循环3个周期后建立小鼠慢性结肠炎模型,于第70天用颈椎脱臼法处死小鼠并取结肠组织标本.肠道炎症程度通过测定结肠长度、HE染色和疾病活动指数评分等方法评估.采用荧光定量PCR技术检测小鼠结肠组织中炎性因子(IL-6、IL-8和TNF-α),IRE1α和RIG-I mRNA表达水平,免疫组化法和蛋白印迹法检测小鼠结肠组织中RIG-I、磷酸化(p)-IRE1α蛋白的表达.结果:对照组小鼠无肠炎表现,而慢性炎症组小鼠结肠出现炎症表现.与对照组相比,慢性炎症组中IL-6、IL-8和TNF-αmRNA的表达量增加,IRE1α和RIG-I mRNA表达量降低(P<0.01).免疫组化结果显示RIG-I蛋白主要表达于小鼠结肠上皮细胞胞质及间质细胞胞质中,p-IRE1α主要在结肠上皮细胞刷状缘、浆细胞等细胞的胞质中表达,蛋白定量结果显示慢性炎症组RIG-I、p-IRE1α蛋白低于对照组(P均<0.001).结论:RIG-I可能通过减低IRE1-RIDD-RIG-I在小鼠结肠炎的发生和发展中起重要作用.
