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GP96基因文献资料
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小鼠热休克蛋白GP96基因真核表达载体的构建及其表达
目的：构建小鼠热休克蛋白GP96（GP96）基因真核表达载体并在真核细胞293T中表达。方法用RT-PCR法从小鼠脾脏扩增出GP96的成熟肽基因片段，先克隆于pMD19-T载体，再亚克隆到真核表达载体pcDNA3.1中。以脂质体法将重组质粒转入293T细胞，免疫印迹法鉴定GP96的蛋白表达。结果限制性内切酶酶切和测序结果表明，扩增出GP96基因完全正确；免疫印迹法检测表明，转染的重组质粒能在293T细胞中高效表达。结论构建的pcDNA3.1-GP96重组载体在293T细胞系中高效表达，为深入研究GP96作为DNA疫苗在病毒性心肌炎中的作用及机制打下基础。
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热休克蛋白gp96表达对B16F10细胞生长的影响
目的探讨热休克蛋白gp96表达对B16F10细胞株生物学行为的影响.方法构建gp96正义和反义真核重组表达质粒pcDNA-hgp96和pcDNA-anti96P,并转染B16F10细胞,G418筛选稳定转染的阳性细胞克隆,然后Western印迹分析细胞gp96的表达情况,绘制细胞生长曲线,观察gp96表达对细胞生长特性的影响.结果转染了gp96正义表达质粒的B16F10细胞gp96表达水平升高,细胞生长缓慢,倍增时间延迟;反义gp96表达质粒明显抑制了B16F10细胞gp96表达,使细胞倍增时间提前.结论热休克蛋白gp96表达水平升高可抑制肿瘤细胞的生长,而gp96表达水平下降则肿瘤细胞生长速度加快,表明gp96在肿瘤发生发展中有非常重要的作用.
