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整合素连接激酶对脐带间充质干细胞向神经干细胞样细胞分化的作用
目的:研究整合素连接激酶(ILK)对脐带间充质干细胞向神经干细胞样细胞分化的影响。方法分离人脐带间充质干细胞,用表达对照绿色荧光蛋白(GFP)和GFP融合野生型ILK、突变型ILK的质粒转染后,用含碱性成纤维细胞生长因子、表皮生长因子、B27的无血清培养基培养。检测间充质干细胞的增殖速度及向神经干细胞样细胞分化的效率。结果转染ILK的间充质干细胞中,ILK稳定表达,增殖速度加快,神经干细胞样细胞分化的效率提高;野生型ILK优于突变型ILK。结论 ILK促进间充质干细胞向神经干细胞样细胞分化。其作用机制与激酶活性有关。
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大鼠角膜缘干细胞分离培养及其横向分化能力初探
目的:体外分离培养大鼠角膜缘干细胞( LSCs),并探讨在细胞因子EGF、bFGF联合RA作用下,LSCs体外横向分化为神经干细胞样细胞的能力。方法体外分离培养LSCs并进行p63免疫组化鉴定。在原代培养的LSCs中,设立2个诱导组进行分化实验,诱导组1加入EGF(20 ng/mL)和bFGF(10 ng/mL),诱导组2加入EGF(20 ng/mL)、bFGF(10 ng/mL)和RA(25 ng/mL),同时设立空白对照组。培养7 d后,收集各组细胞作神经元标志物Nestin的免疫组化检测及阳性细胞计数,收集各组细胞蛋白做蛋白免疫印迹分析各组Nestin蛋白表达情况,相关数据作统计学分析。结果免疫组化结果显示,体外分离培养的LSCs p63呈阳性,诱导分化的2组细胞Nestin呈阳性表达,阳性率分别为(77.01±6.32)%和(84.01±5.43)%,诱导组2的诱导率高于诱导组1,差异具有统计学意义(P<0.05);对照组细胞Nestin呈阴性表达。蛋白免疫印迹结果显示,2个诱导组在240 kDa处可见Nestin蛋白条带,诱导组2 Nestin蛋白表达略高于诱导组1,对照组未见Nestin蛋白条带。结论成功分离培养大鼠LSCs,在细胞因子EGF、bFGF作用下,LSCs具有横向分化为神经干细胞样细胞的能力,同时联合使用RA有促进LSCs向神经干细胞样细胞分化的作用。