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人羊膜间充质细胞的神经生物学特性及其治疗帕金森模型小鼠的实验研究
目的 评价人羊膜组织来源间充质细胞(hAMCs)的神经生物学特性及其脑移植对帕金森病(PD)小鼠的治疗观察.方法 应用免疫细胞化学染色,通过间充质干细胞、神经干细胞、多巴胺能神经元和神经发生相关标记物Vimentin、STRO-1、nestin、CD133、β-tubulin、TH、DAT、Ngn2和mash-1抗体,鉴定在hAMCs中的表达;RT-PCR检测神经干细胞标记物Vimentin及nestin mRNA在hAMCs的表达.C57BL/6小鼠MPTP(i.p.)建立PD模型,将hAMCs移植到右侧纹状体内.通过自发运动和转杆实验以及抗人线粒体和TH抗体在脑纹状体免疫组织化学形态学,评价hAMCs对PD小鼠的治疗作用.结果 经神经细胞培养基诱导培养后的hAMCs表达间充质干细胞、神经干细胞、多巴胺能神经元和上述所有与神经发生相关的特异性标记物.hAMCs移植后的PD小鼠自发运动次数增加(P<0.05),转杆时间延长(P<0.05).结论 hAMCs经体外诱导培养后具有神经细胞特性,移植到PD模型小鼠纹状体内能够改善MPTP所致的运动功能损伤.
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体外培养人羊膜间充质细胞的神经生物学特点
目的:探讨体外培养人羊膜间充质细胞(hAMCs)的神经生物学特征.方法:应用MTS分析法、BrdU掺人法和增殖细胞核抗原(PCNA)的免疫荧光染色,探讨体外培养hAMCs的增殖活性.利用免疫细胞化学法检测hAMCs中间充质细胞标记(STRO-1、Vimentin)、神经干细胞标记蛋白(Nestin、PSA-NCAM)、神经细胞标记蛋白(β-tubulin-Ⅲ、TH)和神经分化相关蛋白(math-1、mash-1)的表达.结果:MTS分析法显示hAMCs在接种后第6-8天增殖速度快,第8-24天活细胞数基本保持稳定;BrdU和PCNA的免疫荧光染色结果显示体外培养hAMCs中具有大量BrdU和PCNA阳性细胞存在;体外培养的hAMCs表达间充质十细胞特异性标记物STRO-1和Vimentin,也表达神经干细胞标记物Nestin和PsA-NCAM,同时还可见神经元特异性标记物β-tubulin-Ⅲ和TH,以及神经元分化相关蛋白math-1和mash-1的表达;体外培养hAMCs中存在有TH/BrdU和β-tubulin-Ⅲ/BrdU双阳性细胞.结论:体外培养的hAMCs表达间充质干细胞、神经干细胞、神经元的特异性标记蛋白,同时具有增殖活性;hAMCs表达神经元分化相关蛋白,提示hAMCs具有向神经元分化的潜能.
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人羊膜间充质细胞向成骨细胞诱导分化的实验研究
目的 观察人羊膜间充质细胞(human amnion mesenchymal cells，hAMCs)体外诱导向成骨细胞分化，为骨组织工程提供种子细胞。方法 从剖宫产后废弃的人羊膜组织分离培养hAMCs，经成骨细胞诱导条件培养基诱导后，对细胞形态特征、碱性磷酸酶、骨桥素、骨钙素表达以及I型胶原分泌进行观察和检测。结果 原代培养的hAMCs形态呈长梭形或不规则形，呈均匀分布生长，传代后细胞体积略变大，约5～7d传代1次。经成骨细胞诱导培养15d后，hAMCs碱性磷酸酶、骨钙素、骨桥素的表达呈阳性，并且检测有I型胶原分泌。结论 hAMCs易于体外分离培养及扩增，体外成骨细胞定向诱导的hAMCs具有典型的成骨细胞的形态和功能性特征，是良好的骨组织工程种子细胞。
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人羊膜间充质细胞对异体外周血淋巴细胞的免疫抑制作用
目的 探讨人羊膜间充质细胞(human amniotic mesenchymal cells,hAMCs)对异体外周血淋巴细胞的免疫抑制作用,阐明人羊膜间充质细胞调节移植免疫排斥的作用机制.方法 从新鲜足月剖宫产废弃的羊膜组织分离出hAMCs并进行鉴定.采用密度梯度离心从健康志愿者外周血中分离出单个核淋巴细胞(PBMLs),在植物血凝素(PHA)刺激下,分别按1∶0.05,1∶0.10,1∶0.20的比例以hAMCs处理,MTS法检测淋巴细胞的增殖,ELISA法检测细胞因子IFN-γ、TNF-α的分泌.结果 hAMCs能明显抑制异体外周血淋巴细胞的增殖,hAMCs与PBMLs比值为0.05∶1,0.10∶1,0.20∶1时的增殖抑制率分别为16.91％、20.83％、28.19％.hAMCs还可显著抑制异体淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的分泌(P＜0.01),并且在一定范围内随着hAMCs数量的增加抑制作用更加明显.结论 hAMCs能抑制异体淋巴细胞增殖并降低淋巴细胞IFN-γ和TNF-α的分泌,这可能是其预防和减轻移植排斥反应发生的机制之一.
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针刺对人羊膜间充质细胞移植治疗去卵巢大鼠骨质疏松的协同效应
目的：探讨针刺联合人羊膜间充质细胞（ human amniotic mesenchymal cells， HAMCs）移植对去卵巢骨质疏松协同效应研究。方法选择雌性未孕的Wistar大鼠45只，完全随机分组分为假手术组、模型组及实验组（针刺＋人羊膜间充质细胞移植），每组各15只。各组手术伤口恢复后，第7天开行针刺＋尾静脉注射HAMCs液（假手术组除外）连续干预12周，于末次干预后24 h，处死大鼠并采集标本。从开始干预至处死，每周测定1次各组大鼠的体质量，双能X 线吸收骨密度仪分别测定左侧股骨中点、远端和近端骨密度，用原子吸收法测定其骨钙含量；干预12周后采用ELISA法检测血清25-羟基维生素D（25-HVD）、I型胶原C端肽（CTX-I）、骨特异性碱性磷酸酶（ BAP）、抗酒石酸酸性磷酸酶5b （ TRAP5b）的表达变化；干预12周后检测各组大鼠生物力学性能的变化。干预12周后RT-PCR技术检测椎骨中转化生长因子β1（ TGF-β1）的基因表达情况。结果假手术组大鼠体重逐渐增加，符合动物自然生长规律，模型组于造模后两个月开始，体重却明显高于假手术组，实验组体重渐增，与假手术组相近。模型组比较假手术组的骨密度和骨钙含量均降低，差异具有统计学意义（ P＜0．05），与模型组较，实验组的骨密度和骨钙含量含量均升高，差异具有统计学意义（ P＜0．05）。 ELISA法显示，血清25-HVD、 CTX-I、BAP、TRAP5b的表达，与假手术组比较，模型组显著降低，与模型组比较，实验组显著升高，（P＜0．05）。生物法力学检测显示，假手术组的极限载荷、极限应力和弹性模量比模型组有显著增高（P＜0．05），实验组的极限载荷和弹性模量比假手术组有显著增高（P＜0．05）。 RT-PCR检测显示TGF-β1的m-RNA的表达，与假手术组、模型组比较，实验组明显上调（P＜0．05）。结论针刺联合人羊膜间充质细胞（HAMCs）移植具有较好的对去卵巢骨质疏松协同效应，可改善去卵巢大鼠骨质疏松症的作用。
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人羊膜间充质细胞定向分化的研究进展
人羊膜间充质细胞源自胎盘羊膜组织,具有间充质干细胞特性和多向分化潜能.在不同生长因子的调节下,人羊膜间充质细胞可分化成内、中、外三个胚层来源的细胞,如神经细胞、成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肝样细胞等.并且人羊膜间充质细胞具有比骨髓间充质干细胞更强的扩增能力和免疫原性低等优势,在组织工程及细胞替代治疗等再生医学领域具有广阔的应用前景.本文就人羊膜间充质细胞分离培养、生物学特性及多向分化潜能方面作一综述.
