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β2-AR-ERK信号通路在制动应激致着床期孕小鼠子宫内膜重建中的作用
本试验以交感肾上腺系统为切入点,探究制动应激影响胚胎着床的作用机制。选用8周龄雌性CD1小鼠,妊娠E1时开始应激,并连续制动应激直至E7(4h/d),取妊娠母小鼠血浆、子宫组织等进行检查。结果发现,①E1母小鼠制动应激之后,血浆皮质酮和去甲肾上腺素含量、血糖水平提高,并诱导孕小鼠胚胎着床位点降低,以及性器官指数降低。②制动应激致E3-E7孕小鼠子宫内膜面积、子宫腺面积比例降低,诱导作为调节子宫内膜重建及血管发育的MMP-9蛋白以及VEGF和CD34阳性细胞降低,利用PCNA和TUNEL方法分别检测子宫内膜细胞的增殖与凋亡状态,发现制动应激诱导E3-E7孕小鼠子宫组织的MODPCNA/MODTUNEL比值下降,Caspase-3蛋白增加。③孕小鼠子宫内膜uNK细胞密度下降,肌层肥大细胞增加；T淋巴细胞的增殖活性及IL-2/ IL-4比值降低。④孕小鼠子宫组织中GSH-PX、 T-SOD 和T-AOC含量降低,而MDA 含量增加,且外源性H2 O2作用于体外培养的孕小鼠子宫内膜基质细胞,细胞增殖活性降低并呈剂量依赖性。⑤孕小鼠子宫组织中pERK1/2和pNF-κBp65蛋白表达增加,并激活了β2-AR mRNA的表达,且β2-AR阳性细胞分布于子宫肌层、腺上皮细胞、腔上皮细胞和蜕膜细胞中,以及体外分离的子宫内膜基质细胞中。⑥体外分离E5孕小鼠子宫内膜基质细胞,添加外源性β-AR激动剂异丙肾上腺素( ISO)使细胞增殖活性降低,同时Caspase-3的含量增加；添加腺苷环化酶激动剂FSK对ISO的刺激产生协同作用；而添加外源性β2-AR阻断剂(Butoxamine)和PKA抑制剂H-89,能显著逆转ISO对细胞的抑增殖与促凋亡作用；添加外源性MEK 抑制剂PD98059和NF-κB 抑制剂PDTC 使细胞增殖活性增加,而Caspase-3的含量显著降低；同时在不同药物添加组中pERK1/2表达的变化趋势与Caspase-3表达趋势一致。以上结果表明,制动应激激活孕小鼠交感肾上腺髓质系统,刺激皮质酮和去甲肾上腺素分泌,经β2-AR介导激活胞内cAMP以及下游PKA信号,直接激活或者间接通过诱导孕小鼠子宫局部的氧化应激产生ROS激活ERK1/2磷酸化,一方面直接激活NF-κB进入细胞核与靶基因结合,产生炎性细胞因子IL-2,使孕小鼠子宫局部Th1/Th2平衡偏向于Th1炎性状态,诱导着床期孕小鼠子宫的局部免疫平衡紊乱；另一方面增加孕小鼠子宫组织Caspase-3的蛋白表达,诱导子宫内膜细胞凋亡,阻滞子宫内膜的妊娠适应性重建,导致子宫内膜容受性的降低,从而不利于孕小鼠胚胎的着床和发育。
