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亲水性琼脂糖包埋培养的大鼠乳腺癌细胞对人乳腺癌细胞生长影响的体外研究
目的 探讨亲水性琼脂糖包埋的大鼠乳腺癌细胞生长上清对人乳腺癌细胞生长的影响.方法 应用亲水性琼脂糖包埋大鼠乳腺癌SHZ-88细胞,使其在凝胶内部生长.通过中性红染色显微镜下观察凝胶内生长细胞的活性.收集不同培养时间的上清,作用于人乳腺癌MCF-7细胞,通过CCK-8检测作用不同时间后的细胞活存状况.结果 通过中性红染色后显微镜观察,在包埋SHZ-88细胞的凝胶内可见散在的死细胞与成团的活细胞.包埋细胞生长的上清能够抑制人MCF-7细胞生长,包埋细胞生长时间越长获得的上清抑制细胞生长能力越强.结论 亲水性琼脂糖包埋的大鼠乳腺癌细胞生长上清能够有效抑制人MCF-7细胞生长.
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敲减VEGFR-1基因抑制乳腺癌细胞增殖的研究
目的:体外水平探讨利用化学修饰的小干扰RNA(small interfering RNA,siRNA)敲减VEGFR-1基因治疗乳腺癌的可行性和特异性.方法:采用阳离子脂质Lipofectamine2000TM作为转染试剂将同时针对人和大鼠VEGFR-1基因的小干扰RNA转染人乳腺癌细胞系MCF-7和大鼠乳腺癌细胞系SHZ-88,敲减VEGFR-1基因的表达;采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法,半定量RT-PCR,蛋白印迹试验等检测VEGFR-1mRNA和蛋白表达及细胞增殖变化.结果:靶向VEGFR-1基因的siRNA转染细胞后,两种细胞增殖均被抑制,同浓度两细胞株指标无显著差异,VEGFR-1mRNA和蛋白的表达均明显降低.各对照组指标则无显著变化.结论:化学修饰的siRNA介导的RNAi能成功敲减VEGFR-1基因的表达、抑制乳腺癌细胞增殖.
关键词： siRNA MCF-7细胞 SHZ-88细胞 血管内皮生长因子受体1 基因治疗 -
逆转录病毒载体介导大鼠乳腺癌细胞共表达MIP-1α和B7-1
目的:建立共表达小鼠MIP-1α和B7-1基因的大鼠乳腺癌细胞株,并进行体外活性检测.方法:应用含不同选择标记的重组逆转录病毒载体,经1 mg/ml G418和2 μg/ml puromycin双药物筛选后获得MIP-1α+B7-1基因共表达的大鼠乳腺癌细胞株.RT-PCR、免疫组化检测mMIP-1α的表达,RT-PCR、流式细胞术检测mB7-1的表达;将共表达MIP-1α和B7-1的肿瘤细胞与大鼠脾淋巴细胞混合培养后,MTT法检测淋巴细胞的增殖指数、琼脂糖打孔法检测共表达MIP-1α和B7-1肿瘤细胞对单个核细胞的趋化活性.结果:经脂质体转染包装细胞产生的重组逆转录病毒上清病毒滴度达4.6×107CFU/L.细胞生长曲线显示,重组逆转录病毒感染对乳腺癌细胞增殖无明显影响.重组逆转录病毒感染的大鼠乳腺癌细胞株SHZ-88/mMIP-1α+mB7-1有B7-1和MIP-1α mRNA及蛋白的表达.淋巴细胞增殖指数PI值SHZ-88/PLXSN组为(0.76±0.25),SHZ-88/mMIP-1α+mB7-1组为(1.95±0.31),后者体外刺激淋巴细胞增殖能力增强(P＜0.01),SHZ-88/pBabe puro组的趋化指数为(0.99±0.19),mMIP-1α+mB7-1组的为(3.88±0.33),后者显著增强了趋化活性.结论:通过逆转录病毒载体介导建立MIP-1α和B7-1基因共表达的大鼠乳腺癌细胞株具有招引单个核细胞,并将其激活的体外生物学活性.
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高糖状态下甲状旁腺素受体1对乳腺癌的作用机制研究
目的 阐明高糖状态下甲状旁腺受体1(PTH1R)对乳腺癌细胞株SHZ-88的作用机制.方法 应用实时(real time) PCR分别检测0(对照组)、5、15、25 mmol/L葡萄糖浓度下PTH1R mRNA水平;构建出PTH1R基因沉默(siPTH1R)的细胞模型后,分别应用MTT法、TUNEL-FITC/Hoechst33258及Western blot法检测对照组、25 mmol/L葡萄糖处理组(高糖组)、25 mmol/L葡萄糖处理的阴性PTH1R基因序列组(高糖siPTH1R NC组)及高糖阳性PTH1R基因序列组(高糖siPTH1R组)细胞活力、细胞凋亡情况及Bax、Bcb2蛋白的表达.结果 随着葡萄糖浓度升高,PTH1R mRNA水平增高,其中25 mmol/L葡萄糖处理后PTH1R mRNA水平高(均P＜0.01);高糖siPTH1R组细胞活力(P＜0.05,P＜0.01及P＜0.01)及Bcl-2表达(均P＜0.01)低于对照组、高糖组及高糖siPTH1R-NC组;高糖siPTH1R组中细胞凋亡水平及Bax表达高于对照组、高糖组及高糖siPTH1R-NC组(均P＜0.01);与对照组比较,高糖组细胞活力(P＜0.01)及Bcl-2表达(P＜0.01)增高,而Bax表达(P＜0.01)降低.结论 高糖状态下PTH1R表达水平与SHZ-88细胞增殖能力有关,抑制PTH1R表达可能为糖尿病合并乳腺癌治疗有效靶点之一.
