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c-fos基因的反义寡聚脱氧核苷酸鞘内注入减弱福尔马林引起的大鼠伤害性行为反应及脊髓背角Fos蛋白和强啡肽A表达的研究
本研究通过鞘内注射c-fos反义寡聚脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotide,AS-ODN)封闭背角中Fos蛋白的表达,观察了Fos蛋白合成和慢痛反应的关系,并分析Fos蛋白合成和强啡肽A(DynA)表达之间的关系.实验组动物(n=5)鞘内预先注射f-fos的AS-ODN(50 μg,5 μl),另两个对照组(每组n=5)分别注射等量生理盐水和AS-ODN的反序核苷酸(reverse oligodeoxynucleotides,RS-ODN,50μg,5 μl);4 h后,各组动物均在一侧后肢脚掌皮下注射formalin(5%,50 μl),并立即用计算动物舔拭注射侧后脚掌累计时间的方法,检测大鼠的伤害性行为反应,行为检测后1 h处死动物,用免疫组化方法检查脊髓背角中Fos蛋白阳性神经元的数量和强啡肽A(1～8)的表达量.结果发现,和两个对照组相比,实验组动物Formalin诱发的伤害性行为反应的第二相明显减弱,同时Formalin注射侧背角Fos蛋白样免疫阳性细胞的数量和DynA含量的灰度值明显减少.本研究结果提示,外周伤害性刺激引起的长期持续的痛反应是以c-fos基因表达增加及受其调控的DynA表达上调为基础的,由此推测在脊髓背角神经元中Fos蛋白和DynA表达的增强可能是出现慢性痛行为反应和痛过敏状态的基础.
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单侧外周伤害性刺激诱发大鼠脊髓中转录因子CREB的双侧磷酸化
cAMP反应成分结合蛋白(cAMP response element-binding protein, CREB)是一种转录因子,它在磷酸化之后可调节靶基因的转录.CREB在133位置的丝氨酸的磷酸化,与脊髓中伤害性传入的处理有关,本文作者等用特殊抗体对此进行了免疫细胞化学研究.在正常大鼠,虽然几乎所有脊髓神经元的核中都可见CREB的轻度着色,但磷酸化的CREB仅见于双侧腰段脊髓的Ⅰ～Ⅱ层(75±15 vs 60±18)和Ⅹ层(9±3).用福尔马林注射引起一侧后脚掌出现炎症时,可在双侧腰段脊髓看到磷酸化CREB细胞核的快速(小于5 min)和节段性的显著增多;它们主要分布在双侧背角表层Ⅰ～Ⅱ层(254±20 vs 262±23)、Ⅹ层(115±13)和双侧Ⅴ～Ⅷ层(346±20 vs 328±26);而在对照和炎症组大鼠的胸段脊髓中均未见磷酸化CREB的增加.在注射CFA诱发一侧炎症或切断一侧坐骨神经的实验组大鼠,也可看到至少延续到第三天的强而双侧性的CREB的磷酸化.这种由一侧后肢伤害性传入引致腰段脊髓中镜像式双侧CREB磷酸化的出现,与一般看到的损伤传入只在同侧脊髓背角引起某些神经化学改变的结果不同,可能是人神经损伤后或在实验动物中出现对侧镜像式疼痛过敏现象的基础.
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μ-和δ-阿片受体参与介导丘脑中央下核内吗啡诱发的抗伤害感受效应
目的研究μ-和δ-阿片受体在介导丘脑中央下核(Sm)内阿片诱发的抗伤害感受效应中的作用.方法用自动检测系统记录大鼠爪底皮下注射福尔马林诱发的伤害性行为,观察Sm内微量注射吗啡和选择性μ-和+δ-阿片受体拮抗剂对伤害性行为的效应.结果吗啡(31 mmol/L,0.5 μL)明显抑制福尔马林诱发的伤害性行为,这种效应可被μ-阿片受体拮抗剂β-funaltrexamine(β-FNA,0.4 mmol/L,0.5 μL)和naloxonazine(0.8 mmol/L,0.5 μL)阻断,部分地被δ-受体拮抗剂naltrindole(0.4 mmol/L,0.5 μL)阻断.结论Sm内注射吗啡诱发的抗伤害感受效应主要由μ-阿片受体介导,部分地由δ受体介导.
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丙帕他莫对福尔马林致痛大鼠行为学及脊髓c-fos蛋白表达的影响
目的 通过观察比较福尔马林致痛大鼠行为学和脊髓背角c-Fos样免疫反应神经元(FLIN)数量的变化,探讨静脉注射丙帕他莫的镇痛效能与机制.方法 雄性SD大鼠30只,随机均分为5组,生理盐水组(NS组)、福尔马林组(F组)、丙帕他莫组(B组)、丙帕他莫预处理组(BF组)和福尔马林丙帕他莫组(FB组).前4组中NS组和B组在注射NS、丙帕他莫10 min后分别于右后足趾皮下注射NS 100μl,F组和BF组分别在注射NS、丙帕他莫10 min后均注射5%福尔马林100 μl.FB组给予福尔马林痛刺激10 min后静脉注射丙帕他莫480 mg/kg.各组行清醒静脉穿刺,注入NS或不同剂量的丙帕他莫后,观察行为表现,注射后立即以5 min为一时间段连续记录1 h内的缩腿、舔咬时间.足底注射后2 h取一脊髓节段做c-Fos免疫组化染色,计算FLIN数量.结果 ①BF组第一期急性早反应时间短于F组(P＜0.05);FB组第二期时间短于F组(P＜0.05).Fos蛋白表达NS组和B组未见或偶见淡染FLIN.F组见大量FLIN主要分布在Ⅰ、Ⅱ层及Ⅴ、Ⅵ层.BF组各区FLIN均减少(P＜0.01).FB组各区FLIN均少于F组相应区域(P＜0.01).结论 静脉注射丙帕他莫能有效抑制大鼠的伤害性行为和致痛侧脊髓背角c-fos蛋白的表达.
