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褪黑素抗大鼠吗啡奖赏效应的表达与脑内CREB及其磷酸化
目的:观察褪黑素(melatonin,Mel)对大鼠吗啡诱导的条件性位置偏爱(CPP)效应表达的影响及此过程中脑内cAMP反应元件结合蛋白(CREB)及其磷酸化的变化.方法:(1)大鼠连续6 d给予吗啡(sc,5 mg·kg-1/d)建立CPP模型,于CPP测试前20 min ip Mel(50和25 mg·kg-1),观察Mel对大鼠吗啡诱导的CPP效应表达的影响.(2)大鼠同上建立吗啡CPP模型,d7上、下午,d8上午ip Mel 50 mg·kg-1,共3次,后一次ip后6 h,采用免疫组化结合计算机图像处理技术测定脑内伏隔核、海马内CREB及磷酸化CREB(p-CREB)的免疫阳性反应强度.结果:Mel 50 mg·kg-1可显著翻转大鼠吗啡诱导的CPP评分升高(P<0.01),同时显著降低吗啡诱导的大鼠伏隔核、海马内p-CREB的上调(P<0.01).结论:Mel抑制大鼠吗啡奖赏效应的表达,此作用可能与其抑制吗啡诱导的伏隔核、海马内p-CREB蛋白水平上调有关.
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鞘内注射HPPE修饰的HEK293对骨癌痛大鼠脊髓背角pCREB表达的影响
目的 观察鞘内注射HPPE基因修饰的HEK293重组细胞(pLV-UbC- HPPE/HEK293),对骨癌痛大鼠行为学和脊髓背角pCREB表达的影响,探讨该重组细胞对大鼠骨癌痛的镇痛作用.方法 雌性SD大鼠48只,随机分成两组,假手术(SHAM,12只)组和骨癌痛(CIBP,36只)组.大鼠左后肢胫骨打孔,SHAM组大鼠注射生理盐水5ul,CIBP组大鼠注射MADB-106癌细胞5ul.于术前1d,术后7、14、21d分别测缩足反射潜伏期(PWL)X线下观察造模部位.将CIBP组随机分为CIBP′,CIBP′+GH,CIBP′+HH组,均12只.行鞘内穿刺并留置导管,分别注射PBS,GH和HH细胞悬液各20ul,隔天,共3次,测定PWL.CIBP′+HH组腹腔注射纳洛酮,再测PWL.实验结束后处死大鼠,取L4～L6脊髓,采用免疫组化法计数pCREB免疫反应阳性细胞数量.结果 (1)CIBP组术后7、14、21d PWL进行性下降(P<0.05),X线显示逐渐骨破坏;SHAM组差异无统计学意义.(2)CIBP′+HH组鞘内注射HH细胞后,PWL增高至(11.68±1.04)s,(P<0.05).(3)CIBP′+HH组腹腔注射纳洛酮后PWL值降至(9.37±1.14)s,具有统计学意义(P<0.05),镇痛效应可被拮抗.(4)pCREB表达量:与CIBP′组相比,CIBP′+HH组降至(38.73±3.92),具有统计学意义(P<0.05).结论 鞘内注射HPPE基因修饰的HEK293细胞后,大鼠行为学变化和脊髓背角pCREB表达降低,表明该重组细胞对大鼠骨癌痛有镇痛效果.
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CREB及p-CREB在前列腺癌细胞增殖中的作用
目的:探讨环磷腺苷效应元件结合蛋白(cAMP-response element binding protein,CREB)及磷酸化CREB(p-CREB)在前列腺癌细胞增殖中的作用.方法:采用组织芯片技术检测人正常前列腺、前列腺增生、不同分级前列腺癌组织中CREB及p-CREB的表达水平;免疫荧光及Western blotting检测人正常前列腺基质永生化细胞WPMY-1、前列腺癌细胞PC3及LNCap中CREB及p-CREB的表达水平;构建重组人源CREB质粒,并转染PC3及LNCap细胞,Western blotting及CCK-8试剂盒检测转染效率及细胞增殖水平的变化.结果:CREB及p-CREB在前列腺癌组织中表达率明显高于正常前列腺(96％vs 50％,88％ vs 40％,P＜0.05)和前列腺增生组织(96％ vs 80％,88％vs 60％,P＜0.05);CREB及p-CREB蛋白水平在前列腺癌PC3及LNCap细胞中表达量显著高于正常前列腺基质永生化细胞WPMY-1[PC3细胞:(5.10±0.62)vs(2.31±0.40)、(4.31±0.54)vs(2.02±0.38);LNCap细胞:(7.5±0.83)vs(2.31±0.40)、(6.15±0.69) vs (2.02±0.38),均P＜ 0.05)];转染重组质粒CREB可上调前列腺癌细胞PC3及LNCap中增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigen,PCNA)的表达(均P＜0.05),且转染后的PC3及LNCap细胞增殖水平明显增加(P＜0.05).结论:CREB及p-CREB在前列腺癌组织、体外培养前列腺癌细胞PC3及LNCap中高表达,并可上调PC3及LNCap中增殖相关基因PCNA的表达,提高细胞增殖水平.
关键词： 环磷腺苷效应元件结合蛋白 磷酸化CREB 前列腺癌 增殖 -
神经病理性疼痛大鼠脊髓磷酸化CREB表达的研究
目的 研究坐骨神经慢性挤压伤(chronic constriction injury,CCI)后不同时点大鼠脊髓磷酸化cAMP反应成分结合蛋白(p-CREB)含量的变化.方法 32只160～180 g雄性SD大鼠中,8只为正常对照,其余24只做成CCI模型.用Von Frey细丝测定大鼠后爪触诱发痛的变化,并于术后7、14和30 d处死(n＝8),取L4～L6脊髓用以免疫印迹(Western blot)方法测定p-CREB的表达量.结果 CCI大鼠结扎侧在术后7、14 d出现明显的机械感觉异常(P＜0.01),30 d后基本消失.与正常大鼠相比,CCI大鼠p-CREB含量在术后7、14 d均出现明显升高(P＜0.01),术后30d 恢复到正常水平.结论 CCI大鼠疼痛模型中脊髓p-CREB含量明显增高,并且随疼痛症状消失恢复到正常水平.提示脊髓p-CREB在慢性神经性疼痛中发病机制中有一定的作用.
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单侧外周伤害性刺激诱发大鼠脊髓中转录因子CREB的双侧磷酸化
cAMP反应成分结合蛋白(cAMP response element-binding protein, CREB)是一种转录因子,它在磷酸化之后可调节靶基因的转录.CREB在133位置的丝氨酸的磷酸化,与脊髓中伤害性传入的处理有关,本文作者等用特殊抗体对此进行了免疫细胞化学研究.在正常大鼠,虽然几乎所有脊髓神经元的核中都可见CREB的轻度着色,但磷酸化的CREB仅见于双侧腰段脊髓的Ⅰ～Ⅱ层(75±15 vs 60±18)和Ⅹ层(9±3).用福尔马林注射引起一侧后脚掌出现炎症时,可在双侧腰段脊髓看到磷酸化CREB细胞核的快速(小于5 min)和节段性的显著增多;它们主要分布在双侧背角表层Ⅰ～Ⅱ层(254±20 vs 262±23)、Ⅹ层(115±13)和双侧Ⅴ～Ⅷ层(346±20 vs 328±26);而在对照和炎症组大鼠的胸段脊髓中均未见磷酸化CREB的增加.在注射CFA诱发一侧炎症或切断一侧坐骨神经的实验组大鼠,也可看到至少延续到第三天的强而双侧性的CREB的磷酸化.这种由一侧后肢伤害性传入引致腰段脊髓中镜像式双侧CREB磷酸化的出现,与一般看到的损伤传入只在同侧脊髓背角引起某些神经化学改变的结果不同,可能是人神经损伤后或在实验动物中出现对侧镜像式疼痛过敏现象的基础.
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三七总皂甙对吗啡戒断大鼠海马磷酸化CREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性的影响
目的:研究三七总皂甙(PNS)对吗啡依赖及纳络酮催促戒断大鼠海马组织CREB,pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性的影响,探讨PNS抑制吗啡戒断症状的作用机制. 方法:应用剂量递增法皮下注射盐酸吗啡建立吗啡躯体依赖模型,采用腹腔注射纳络酮建立催促戒断模型,大鼠在给予吗啡的同时,采用4种不同剂量PNS进行灌胃. 采用Western blot和电泳迁移率改变分析法(EMSA)分别观察PNS对吗啡依赖及戒断大鼠海马组织总CREB,pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性的影响. 结果:①不同剂量PNS组、吗啡成瘾(MOR)组及纳络酮催促戒断(NAL)组大鼠海马组织总CREB蛋白表达与对照组相比无显著性差异(P>0.05);②MOR组pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性数值略高于对照组(P>0.05),NAL组pCREB蛋白表达及CREB/DNA结合活性数值明显高于对照组和MOR组(P<0.01);③PNS可以剂量依赖性的抑制纳络酮催促戒断所引起的pCREB蛋白表达增高和CREB/DNA结合活性的增强. 结论:PNS可以剂量依赖的抑制吗啡成瘾及纳络酮催促戒断诱导的大鼠海马组织CREB磷酸化和CREB/DNA结合活性的增强.
