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角膜缘干细胞移植与角膜干细胞移植联合丝裂霉素C治疗复发性翼状胬肉疗效比较
目的:比较自体角膜干细胞移植(以下简称自体移植)与角膜干细胞移植联合丝裂霉素C(以下简称联合移植)治疗复发性翼状胬肉的疗效.方法:对复发性翼状胬肉106例112眼分A、B组,A组55例59眼行自体移植手术;B组51例53眼行联合移植手术.术后随访6～24个月,比较两组胬肉复发情况.结果:A组59眼复发13眼,复发率20.0%,B组53眼复发6眼,复发率11.3%.结论:联合移植比自体移植更能降低复发性翼状胬肉复发率.
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自体角膜缘上皮移植治疗翼状胬肉43例分析
对我院2005-03/2006-07 43例翼状胬肉患者行自体角膜缘上皮移植术治疗分析如下.1 临床资料1.1 一般资料 本组单眼33例,双眼10例,男21例,女22例,年龄36～71(平均46.1)岁.均在手术显微镜下行翼状胬肉切除联合自体角膜缘上皮移植术.
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异体角膜缘上皮移植术34例的护理
2004-01/2007-03我科成功地为34例眼外伤角膜混浊患者施行异体角膜缘上皮移植术,经精心治疗和护理,效果满意,护理体会如下.
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自体组织工程化角膜上皮修复角膜缘缺陷症
目的:用组织工程方法构建角膜上皮组织,观察自体工程化角膜上皮修复角膜缘缺陷症的可行性.方法:①实验于2000-01/2003-12在南京医科大学第一临床医学院中心实验室和内分泌科实验室完成.选用新西兰白兔15只,雌雄不拘.用手术方法做成单眼角膜缘缺陷动物模型,为移植实验的受体眼.另一只眼为供体眼.15只兔被随机分为3组:自体角膜上皮移植,羊膜移植组,对照组.②自体角膜上皮移植组:取供体眼角膜缘上皮组织约3 mm3,体外培养.对原代培养和传代培养的角膜干细胞进行形态学观察,采用糖原PAS反应鉴定细胞糖原染色;采用免疫组化法鉴定细胞角蛋白AE1表达;对培养细胞进行透射电镜和扫描电镜观察.在去除上皮的保存人羊膜组织上,接种培养细胞,气液界面培养2周构建复层上皮组织.倒置显微镜观察细胞形态和生长特征;组织固定,包埋,切片,染色,观察细胞生长状态和蛋白表达.透射电镜观察超微结构.5只眼成模后4周,受体眼去除角膜浅层新生血管膜,行自体培养角膜上皮移植术.羊膜移植组:5只眼成模后4周,行羊膜移植修复角膜表面;对照组:5只眼成模后不做处理,为模型对照组.③移植实验后7,10,20,30 d,分别行裂隙灯显微镜检查,角膜荧光素染色,眼前部照相.并分别处死各组动物,取手术区域角膜组织,甲醛固定,石蜡包埋,病理切片,染色,镜检观察.结果:①培养细胞的生长状态:原代培养48 h细胞贴壁,15 d左右形成单层.传代培养次日细胞贴壁,10 d形成良好的单层.细胞胞体饱满,呈多角形,大小基本一致.②培养细胞的形态学特征:苏木精-伊红染色,细胞呈多角形,核呈长圆形,细胞大小一致,排列整齐.AE1单克隆抗体染色阳性,PAS染色阴性.③培养细胞的超微结构:透射电镜可见培养细胞之间有桥粒连接,缝隙连接.扫描电镜可见细胞表面有微绒毛结构.④羊膜上接种细胞的生长特征:24 h细胞贴壁生长,1周左右融合成单层.气液界面培养,细胞透明饱满,均匀成片生长,持续培养2周,细胞呈复层生长.⑤组织工程化角膜上皮形态特征:苏木精-伊红染色,细胞呈多角形,在羊膜上融合成片.组织切片,细胞在羊膜上可达到四五层.透射电镜可见桥粒样结构.⑥自体组织工程化角膜上皮修复实验:自体角膜上皮移植组:移植区角膜上皮细胞覆盖,呈复层排列,基底细胞呈柱状,基底膜完整.基质内有炎性细胞和红细胞浸润.供体角膜未出现临床病理性损伤.羊膜移植组:移植区域表层有上皮细胞覆盖,层次紊乱,极性消失.基质内有炎性细胞和红细胞浸润.对照组:角膜上皮排列紊乱,基底膜不完整,基质内有中性白细胞和红细胞浸润.结论:①角膜干细胞在体外能够培养传代.②培养角膜干细胞在保存人羊膜上能够生长,经气液界面培养,构建出复层上皮组织,与正常角膜上皮组织近似.③自体工程化角膜上皮可用于修复角膜缘缺陷症.
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组织块培养角膜缘上皮细胞的生物学特征观察
目的观察以人羊膜为底物组织块培养角膜缘上皮细胞的生物学特征.方法取含有上皮细胞大小约2 mm×2 mm、厚约200 μm兔角膜缘组织,剪切成4个小的组织块,用消化液消化至组织块变疏松后放在去除上皮细胞的羊膜上培养,每2～3 d用倒置显微镜观察,定期取羊膜进行细胞组织学、免疫组织化学及电镜检查.结果角膜缘组织块在羊膜上培养8 d,羊膜上培养的角膜缘上皮细胞出现汇合并部分成层,培养16 d,细胞形成3～4层,并很好地附着于下面的羊膜上,羊膜上培养的细胞经广谱角蛋白(pan-keratin,PK)抗体和抗增殖细胞核抗原(proliferating cell nuclear antigan,PCNA)单克隆抗体免疫组织化学染色呈阳性反应.结论羊膜作为底物组织块培养的角膜缘上皮细胞短期内能形成多层且具有较强增殖能力,可以用来移植.
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翼状胬肉组织中ATP结合盒转运蛋白B5的表达变化及意义
背景 角膜缘干细胞(LSCs)缺乏可引起多种眼表疾病,如翼状胬肉等.ATP结合盒转运蛋白B5(ABCB5)是新发现的特异性LSCs标志物,研究ABCB5在翼状胬肉组织中的表达变化对于翼状胬肉的防治具有重要的临床意义. 目的 研究ABCB5在翼状胬肉组织中的表达变化,探讨其在翼状胬肉发生和发展中的作用.方法 收集2015年1-11月在解放军474医院行原发性翼状胬肉切除术的手术标本37例,同期收集年龄匹配的行斜视矫正术和视网膜脱离复位术患者的正常结膜组织22例.采用免疫组织化学法检测ABCB5在翼状胬肉组织标本中的表达和定位,分别采用Western blot和实时荧光定量PCR法检测翼状胬肉标本中ABCB5蛋白及其mRNA的相对表达量,并与正常结膜标本进行比较. 结果 ABCB5蛋白表达于所有22例正常结膜复层扁平细胞的细胞质和细胞核中,以基底层细胞中表达更为明显,呈现明显极性.在37例翼状胬肉标本中,可见ABCB5阳性表达者34例,占91.89％,ABCB5表达阴性者3例,占8.11％.正常结膜组和翼状胬肉组ABCB5蛋白相对表达量分别为0.90±0.31和0.59±0.41,ABCB5 mRNA表达量分别为1.01±0.26和0.65±0.32,翼状胬肉组ABCB5蛋白和mRNA的相对表达量均明显低于正常结膜组,差异均有统计学意义(t=-0.266,P=0.011;t=-4.560,P=0.000). 结论 LSCs标志物ABCB5的表达下调提示LSCs的减少和缺失与翼状胬肉的发生和发展有关,提示ABCB5检测可能作为翼状胬肉发生和发展、术后复发及疗效评估的观察指标之一,也可能成为翼状胬肉的治疗靶点.
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ROCK抑制剂Y-27632在角膜保存时对角膜缘干细胞活性的促进作用
背景 角膜缘干细胞(LSCs)对维持角膜上皮的稳定和角膜组织透明性有重要作用.Rho关联卷曲螺旋蛋白激酶(ROCK)抑制剂Y-27632能够促进人胚胎干细胞、角质上皮细胞等的增生,减少细胞凋亡.目的 探讨Y-27632对离体兔角膜保存和体外LSCs扩增能力的影响. 方法 在细胞培养基MEM中加入质量分数12.5％硫酸软骨素、质量分数10.0％低分子右旋糖酐、20.0 mg/L地塞米松、100 mg/L妥布霉素注射液、9.5 g/L Hepes,使用时添加0.375 mg/L L-谷氨酰胺,制备成角膜活性保存液.将新西兰大白兔的角膜组织片分别置于含或不含Y-27632的角膜活性保存液中保存4、7、14d,采用质量分数0.25％锥虫蓝和质量分数0.2％茜素红染色法观察角膜内皮细胞密度及形态,采用Giemsa染色法并使用Image J图像分析软件计数克隆球数量和LSCs活性,计算LSCs存活率和克隆形成效率. 结果 角膜片保存4d时,Y-27632保存液组和单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞形态无明显差别,角膜片保存7d时,Y-27632保存液组角膜内皮细胞形态仍保持规则的六边形,而单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞的细胞膜轻微皱缩,少数细胞体积变大.角膜片保存14 d时单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞可见较多的茜素红斑.单纯角膜中期保存液组角膜内皮细胞计数为(2 262±75)/mm2,Y-27632保存液组角膜内皮细胞计数为(2 425 ±95)/mm2,差异有统计学意义(P＜0.001).新鲜角膜片和角膜片保存4d时,Y-27632保存液组和单纯角膜中期保存液组LSCs的克隆球均较大,其内细胞数较多,而保存7d和14 d时,与Y-27632保存液组比较,单纯角膜中期保存液组LSCs克隆球直径明显缩小.新鲜分离的角膜片和角膜片保存4d时,Y-27632保存液组与单纯角膜中期保存液组LSCs的克隆形成率和角膜上皮细胞存活率的差异均无统计学意义(均P＞0.05);角膜片保存7d和14d时,角膜缘上皮细胞的活性率分别为(73.00±2.12)％和(56.00±0.71)％,明显高于单纯角膜中期培养液组的(66.00±4.00)％和(49.00±0.71)％,差异均有统计学意义(t=3.098,P=0.018;t=9.798,P=0.000);角膜片保存7d和14 d时,Y-27632保存液组与单纯角膜中期保存液组LSCs的克隆形成效率分别为(11.05±0.21)％和(3.10±1.97)％,明显高于单纯角膜中期保存液组中的(2.05±1.20)％和(0.40±0.14)％,差异均有统计学意义(t=18.107,P=0.000;t=3.184,P=0.017).结论角膜保存液中添加Y-27632可明显提高离体角膜保存的效果,同时可维持LSCs的活性及克隆形成能力.Y-27632可作为角膜保存液的有效添加成分.
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反向切除联合自体角膜缘干细胞移植术治疗翼状胬肉98例
[目的]观察反向切除翼状胬肉联合自体角膜缘干细胞移植术治疗翼状胬肉的临床疗效.[方法]对98例116眼行反向切除翼状胬肉联合自体角膜缘干细胞移植术.[结果]随访12～36个月,仅6例复发.[结论]反向切除翼状胬内联合自体角膜缘干细胞移植术治疗翼状胬肉,方法简便,效果满意.
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自体角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉的观察与护理
[目的]探讨自体角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉的观察与护理.[方法]对80例翼状胬肉行自体角膜缘干细胞移植手术的病人,进行针对性的术前心理护理,术后加强眼部的观察与护理,认真做好健康教育.[结果]80例病人经手术治疗和护理干预,全部康复出院,无并发症发生.[结论]自体角膜缘干细胞移植治疗翼状胬肉能有效地防止胬肉复发,加强局部观察和护理以及健康教育是手术成功的有力保障.
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单纯翼状胬肉切除术联合角膜缘干细胞移植术的护理
单纯的胬肉切除手术复发率高达89%[1].本院自2003年开始采用角膜缘干细胞移植术治疗原发性翼状胬肉,护理上予以心理疏导和专科护理,取得较好的临床疗效,现报道如下.
