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活动性肺结核患者诊断指征与抗体水平观察
目的:调查痰结核菌培养阳性、培养阴性、有空洞和无空洞活动性肺结核患者(TB)血清抗PPD抗体和抗38KDa抗原抗体阳性率和特异度.方法:采用SPA-ABC ELISA检测各组TB和健康人血清PPD抗体和抗38KDa抗体.结果:培阳TB、培阴TB与健康人血清PPD抗体和38KDa蛋白抗体检测阳性率分别为70.6%、36%、3.8%和84.7%、76%、0.96%,38KDa和PPD特异度分别为91%和87.8%;空洞TB、无空洞TB和健康人PPD抗体和38KDa蛋白抗体的阳性率分别为79%、51.2%、4.95%和85.5%、73.2%、1.98%,38KDa抗原和PPD用于空洞结核病血清学诊断的特异度分别为93%和91.9%.结论:38KDa抗原用于血清学诊断对活动性肺结核有很高的阳性率和特异度.
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问号钩端螺旋体lipL21基因改建及其表达产物免疫原性变化和定位
目的:改建问号钩端螺旋体(简称钩体)lipL21基因核苷酸序列以提高表达产量并了解基因改建前后表达产物免疫原性变化,确定外膜脂蛋白LipL21在钩体表面的定位.方法:参照大肠杆菌偏爱密码子设计,合成lipL21基因核苷酸序列并构建其原核表达系统.采用SDS-PAGE和BioRad凝胶图象分析系统检测改建前后lipL21基因表达量变化.采用钩体TR/Patoc Ⅰ抗血清为一抗的Western blot鉴定改建前后两种目的重组蛋白rLipL21s的免疫反应性,显微镜凝集试验(MAT)比较改建前后rLipL21s抗血清对不同钩体血清群的交叉免疫凝集效价变化.应用免疫电镜技术对LipL21进行定位.结果:改建前后lipL21基因表达量分别为细菌总蛋白的8.5%和46.5%.两种rLipL21均能与TR/Patoc Ⅰ抗血清发生免疫结合反应,免疫家兔后均能产生特异性抗体.两种rLipL21兔抗血清对我国15群15型钩体参考标准株MAT效价相近,均为1∶80~1∶320.LipL21位于钩体外膜表面.结论:LipL21是钩体表面抗原.改建后的lipL21基因可明显提高原核表达产量,其产物可保持良好的抗原性和免疫反应性,其抗体具有广泛的交叉免疫凝集活性.