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磁性纳米四氧化三铁颗粒对卵巢癌细胞株SKOV3/DDP耐药的逆转作用
目的 探讨磁性纳米四氧化三铁颗粒(Fe3O4-MNPs)逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株(SKOV3/ DDP)耐药性的机制.方法 将SKOV3/DDP细胞分为对照组、顺铂(DDP)组、Fe3O4-MNPs组和DDP+Fe3O4-MNPs组,用Western blot方法检测P-糖蛋白(P-gp)、肺耐药相关蛋白(LRP)和多耐药相关蛋白1(MRP1),电感耦合等离子体原子发射光谱(ICP)法测定细胞内铂含量.结果 DDP+Fe3O4-MNPs组P-gp、LRP和MRP1蛋白表达水平较DDP组下降明显(P<0.05).DDP+Fe3O4-MNPs组细胞内铂含量明显高于DDP组(P<0.05).结论 Fe3O4-MNPs逆转耐药的作用机制可能与Fe3O4-MNPs促进DDP进入细胞内,下调P-gp、LRP和MRP1蛋白表达,提高细胞内DDP浓度有关.
关键词： 卵巢肿瘤 抗药性 肿瘤 磁性纳米四氧化三铁颗粒 SKOV3/DDP -
Vandetanib对人卵巢癌细胞抑制作用机制探讨
目的 探讨Vandetanib对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3和卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的增殖抑制作用及其机制.方法 采用MTT法检测体外不同时间不同浓度的Vandetanib对SKOV3及SKOV3/DDP细胞的杀伤作用,计算半数抑制浓度(IC50);流式细胞术检测药物对细胞凋亡及其周期分布变化;采用蛋白质印迹法分析凋亡基因Bcl-2、Bax及反映肿瘤细胞侵袭力的基因MMP-2的蛋白表达变化.结果 与对照组相比,Vandetanib能明显抑制SKOV3和SKOV3/DDP生长,呈时间-剂量依赖性,IC50值均呈明显减小趋势.32 μmol/L的Vandetanib作用SKOV3和SKOV3/DDP 72 h后,抑制率分别为(43.21±0.92)％和(56.74±1.09)％,64μmol/L的Vandetanib作用SKOV3和SKOV3/DDP 72 h后,抑制率分别为(55.37±1.21)％和(79.20±0.39)％,耐药株SKOV3/DDP的抑制率明显高于敏感株SKOV3,差异有统计学意义,P＜0.05.流式细胞术结果显示,随时间浓度的增加,两种细胞凋亡明显增加,G1期细胞增加,S期和G2期细胞减少,差异有统计学意义,P＜0.05.蛋白印迹法结果显示,药物作用于SKOV3细胞株Bcl-2、MMP-2表达减少,Bax表达无明显变化;药物作用于SKOV3/DDP细胞株Bcl-2表达减少,Bax表达增加,耐药株不表达MMP-2.结论 Vandetanib对两种细胞株生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用,可以诱导细胞凋亡并将细胞阻滞于G1期,其机制与下调Bcl-2/Bax、MMP-2表达有关,有利于降低卵巢癌细胞的侵袭力.
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Beclin1表达抑制SKOV3/DDP细胞增殖机制探讨
目的:探讨自噬基因Beclin1通过影响血管生成素的表达对SKOV3/DDP细胞增殖抑制的可能机制.方法:脂质体包裹重组构建pcDNA3.1-Beclin1和pSUPER-Beclin1质粒后,分别体外转染SKOV3/DDP细胞,并筛选稳定表达株,通过实时荧光定量RT-PCR检测不同细胞株中Beclin1、Ang-1、Ang-2及Tie-2受体mRNA表达,蛋白质印迹法检测Beclin1、Ang-1、Ang-2及Tie-2蛋白水平变化,MTT法测定细胞生长增殖情况.结果:pcDNA3.1-Bec组Beclin1 mRNA定量为31.39±3.16,明显高于未转染对照组的1.03±0.08,P＜0.001;而pSUPER-Bec组为0.29±0.05,较对照组明显降低,P=0.003.pcDNA3.1-Bec组Ang-1 mRNA定量为6.13±0.29,明显低于对照组的9.28±0.53,P=0.023.pSUPER-Bec组Ang-2 mRNA定量为7.33±0.35,较对照组的11.36±0.59明显降低,P=0.021.pSUPER-Bec组Tie2 mRNA定量为7.96±0.38,与空白对照组的13.23±0.61相比亦明显降低,P=0.018.MTT法检测结果提示,pcDNA3.1-Bec组转染48 h吸光度值为1.13±0.06,72 h为1.21±0.05,96 h为1.39±0.06;与未转染对照组的1.24±0.05、1.49±0.05及1.93±0.06比较,细胞增殖均明显减慢,F值分别为11.136、20.827和41.633,P值分别为0.029、0.011和0.005.pSUPER-Bec组转染48 h为1.52±0.06,72 h为1.88±0.06,96 h为2.16±0.08,与对照组比较,细胞增殖均明显增快,F值分别为18.976、33.819和15.265,P值分别为0.012、0.007和0.016.结论:Beclin1过度表达能抑制SKOV3/DDP细胞增殖,其机制可能与Ang及其Tie-2受体的异常表达和平衡失调有关.
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重楼皂苷Ⅶ与二氧化硅纳米复合体对卵巢癌耐药性的体外影响
目的 探讨重楼皂苷Ⅶ联合二氧化硅纳米复合体对于卵巢癌的耐药性.方法 应用MTT法测定重楼皂苷Ⅶ联合二氧化硅纳米复合体对人卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP的增殖抑制率;流式细胞术和Hoechst 33342染色法检测重楼皂苷Ⅶ联合二氧化硅纳米复合体对人卵巢癌耐药细胞SKOV3/DDP的细胞凋亡率及细胞周期时相分布的影响;蛋白免疫印迹法检测凋亡相关蛋白的表达改变.结果 重楼皂苷Ⅶ对SKOV3/DDP细胞的增殖有明显抑制作用,抑制率随药物浓度增加而增高,具有明显的量-效关系(P＜0.05).重楼皂苷Ⅶ、二氧化硅纳米复合体对SKOV3/DDP细胞作用48、24 h组比较细胞增殖抑制率均明显提高(P＜0.05).Hoechst 33342染色结果显示,50及100μmol/L的重楼皂苷Ⅶ作用SKOV3/DDP细胞24 h后,不同剂量均能引起细胞出现凋亡的典型表现,即细胞核的深染、凝集和固缩.与阴性对照组比较早期凋亡细胞比例明显增高.蛋白灰度分析结果,与对照组比24 h重楼皂苷Ⅶ处理SKOV3/DDP细胞,50和100 μmol/L剂量组组裂解caspase 3分别增高了5.71倍和11.06倍,Bcl-2表达分别下降了33.3％和61.1％,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 重楼皂苷Ⅶ、二氧化硅纳米复合体对SKOV3/DDP增殖有明显抑制作用,呈明显的浓度依赖性,与时间有相关性,它可引起早期凋亡SKOV3/DDP细胞比例显著增加.
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ERCC1基因表达与磁性Fe3O4纳米颗粒逆转卵巢癌细胞耐药性的关系
目的 探讨磁性Fe3O4纳米颗粒(Fe3O4-MNPs)逆转人卵巢癌顺铂耐药细胞株(SKOV3/DDP)的耐药性的可能性及其机理.方法 将SKOV3/DDP分为对照组、顺铂组、Fe3O4-MNPs组、顺铂+Fe3O4-MNPs组等4个组,流式细胞技术测定细胞凋亡、电感耦合等离子体原子发射光谱法(ICP-AES)测细胞内顺铂的含量,及RT-PCR检测切除DNA修复基因ERCC1 mRNA在SKOV3/DDP中的表达.结果 在顺铂+Fe3O4-MNPs组中,细胞凋亡率及细胞内铂含量均高于顺铂组(P<0.05);ERCC1 mRNA的表达明显低于顺铂组(P<0.05).结论 Fe3O4-MNPs可以逆转卵巢癌细胞对顺铂的耐药性,其作用可能是通过提高细胞内铂浓度、下调ERCC1表达来逆转SKOV3/DDP对顺铂的耐药.
关键词： 磁性纳米Fe3O4颗粒 SKOV3/DDP 耐药逆转 ERCC1基因 -
奥曲肽对人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP移植瘤增殖的影响
目的 探讨奥曲肽对人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP裸鼠移植瘤生长的影响.方法 将SKOV3/DDP细胞接种雌性BALB/c-nu/nu裸鼠右腋前皮下构建移植瘤动物模型,成瘤后随机分成4组.奥曲肽组(A):奥曲肽100 μg·kg<'-1>·d<'-1>,用药28 d;顺铂组(B):顺铂4mg·kg<'-1>·d<'-1>,成瘤后第1、8、15、22天用药;联合组(C):奥曲肽和顺铂联用;对照组(D):生理盐水对照.用药4周后处死裸鼠,取肿瘤标本计算瘤重和瘤体积,并采用免疫组织化学法检测瘤块中生长抑素受体2(SSTR2)和表皮生长因子受体(EGFR)的表达.结果 各用药组肿瘤标本的瘤重、瘤体积均低于D组,C组的瘤重、瘤体积低于A、B组(P<0.01).各组移植瘤细胞均有SSTR2表达;EGFR表达量D组显著高于其他各组(P<0.01),C组及A组EGFR表达量低于其他两组(B<0.01).结论 奥曲肽能抑制人卵巢癌耐顺铂细胞株SKOV3/DDP的裸鼠移植瘤的生长,并与顺铂有协同作用.
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磁性纳米Fe3O4颗粒逆转卵巢癌SKOV3/DDP耐药性的研究
NPs组细胞凋亡率较DDP组明显提高(P<0.05).DDP+Fe3O4-MNPs组细胞内顺铂含量明显高于DDP组(P<0.05).结论 Fe3O4-MNPs可与化疗药物顺铂协同,逆转卵巢癌细胞对DDP的耐受性.其作用可能是通过提高细胞内药物聚集实现的.
关键词： 卵巢癌 磁性纳米四氧化三铁颗粒 SKOV3/DDP 耐药 -
雷公藤多苷增强耐顺铂人上皮性卵巢癌SKOV3/DDP细胞株顺铂敏感性的体外研究
目的:探讨雷公藤多苷(GTW)对耐顺铂人上皮性卵巢癌细胞株(SKOV3/DDP)的顺铂(DDP)增敏作用及机制.方法:将对数生长期的SKOV3/DDP细胞随机分为8组:空白对照组、10μg/mL DDP组、50 μg/mL GTW组、800 μg/mLGTW组、3 200 μg/mL GTW组、10 μg/mL DDP+50 μg/mL GTW组、10 μg/mL DDP+800μg/mLGTW组、10 μg/mL DDP+3 200 μg/mL GTW组,利用CCK-8法、流式细胞术、Western blot法检测各组细胞生长、细胞凋亡以及细胞谷胱甘肽S转移酶-π(GST-π)基因蛋白、P-糖蛋白(MDR1)、信号转导和转录激活因子3(STAT3)、p-STAT3的表达.结果:DDP与GTW联用在抑制SKOV3/DDP细胞生长作用上呈现相加效应;800、3 200 μg/mLGTW分别与10 μg/mL DDP联用后,可显著促进SKOV3/DDP细胞凋亡,下调p-STAT3的表达(P＜0.05).结论:GTW可显著增强SKOV3/DDP细胞对DDP的敏感性,其作用机制可能是下调STAT3信号通路中的p-STAT3表达.
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神经酰胺增强卵巢癌顺铂敏感性的体外研究
目的:探讨神经酰胺增强卵巢癌顺铂敏感性的作用及机制,为筛选有效的卵巢癌顺铂耐药逆转剂提供实验依据.方法:本研究采用MTT法测定不同剂量的C6-神经酰胺(Ceramide C6)(5、10、20、40μmol/L)对卵巢癌顺铂化疗的增敏作用,以RT-PCR、Western blot法检测Ceramide C6对肿瘤细胞Bcl-2 mRNA及其蛋白表达的影响,应用流式细胞技术观察Ceramide C6对肿瘤细胞凋亡的影响.结果:Ceramide C6对SKOV3、SKOV3/DDP细胞生长有抑制作用,与DDP联合应用时可增强DDP敏感性.SKOV3细胞中,与对照组相比,不同浓度Ceramide C6使顺铂敏感性分别增加了7.23％、20.14％、45.02％、57.75％.SKOV3/DDP细胞中,顺铂敏感性分别增加了23.08％、24.57％、45.86％、65.78％.随Ceramide C6浓度增加,SKOV3和SKOV3/DDP细胞中Bcl-2 mRNA及蛋白表达逐渐减低,差异有统计学意义(F=41.780,P=0.000；F=223.258,P=0.000;F=98.306,P=0.000；F=224.687,P=0.000).Ceramide C6可增加SKOV3、SKOV3/DDP细胞凋亡率,差异有统计学意义(F=135.625,P=0.000; F=224.906,P=0.000).结论:神经酰胺可能通过抑制肿瘤细胞Bcl-2 mRNA及其蛋白表达,诱导肿瘤细胞凋亡途径,增强顺铂对卵巢癌SKOV3和SKOV3/DDP细胞体外生长的抑制作用,在一定程度上逆转了卵巢癌顺铂耐药.
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奈达铂体外诱导人卵巢癌顺铂耐药细胞凋亡的机制
目的 探讨研究奈达铂(NDP)体外对人卵巢癌顺铂原发耐药细胞株SKOV3和继发耐药株SK-OV3/DDP的抑制作用及其机制.方法 采用MTT法检测体外不同时间不同浓度的NDP对SKOV3及SKOV3/DDP细胞的杀伤作用,计算半数抑制浓度(IC50)；流式细胞术(FCM)测定给药前后细胞凋亡率及周期分布变化；半定量PCR分析凋亡基因Bcl-2,Bax,caspase-3,caspase-9及反应肿瘤细胞侵袭力的基因MMP-2的表达变化.结果 NDP能明显抑制SKOV3及SKOV3/DDP生长,呈时间剂量依赖性；流式结果显示随时间、浓度增加,SKOV3和SKOV3/DDP细胞凋亡明显增加,S期细胞的比例增加,差异均有统计学意义(P＜0.05).与对照组相比,Bcl-2、MMP-2表达减少,Bax,caspase-3,caspase-9表达增加.结论 NDP可抑制SKOV3和SKOV3/DDP细胞增殖,其机制可能与诱导细胞凋亡,细胞S期阻滞,下调Bcl-2及上调Bax,caspase-3,caspase-9的表达有关；同时可下调MMP-2的表达,有利于降低卵巢癌细胞的侵袭力.
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洛铂诱导顺铂耐药卵巢癌SKOV3/DDP细胞的凋亡
目的 探讨洛铂体外诱导人卵巢癌顺铂耐药SKOV3/DDP细胞凋亡及其机制.方法 采用四甲基偶氮唑盐(MTT)法测定不同浓度和时间洛铂对SKOV3/DDP细胞的生长抑制作用,并与其素本细胞SKOV3(敏感株)相比较;进一步通过光镜及透射电镜观察SKOV3/DDP细胞的形态学改变;并采用流式细胞仪检测细胞周期变化.结果 洛铂作用SKOV3/DDP细胞的增殖呈时间剂量依赖模式受到抑制,与SKOV3细胞相比,差异无统计学意义(P＞0.05);一定浓度的SKOV3/DDP作用一定时间,可诱导SKOV3/DDP细胞发生凋亡;光镜和透射电镜下可见典型的凋亡细胞形态学改变;流式细胞技术分析发现洛铂作用首先引起细胞周期分布的改变,随用药时间的延长,凋亡率逐渐升高.结论 洛铂通过诱导凋亡而抑制体外培养的SKOV3/DDP细胞生长,其机制可能与细胞G0/G1期阻滞有关.
