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2-APB对顺铂诱导人卵巢癌SKOV3细胞内质网应激途径凋亡的影响
目的 观察2-APB对顺铂诱导人卵巢癌SKOV3细胞内质网应激途径凋亡的影响.方法 体外培养SKOV3细胞,分别加入3.5、7和14μg/ml顺铂作用12和24 h后,用MTT法检测顺铂对SKOV3细胞的抑制率,应用激光共聚焦显微镜观察细胞质内钙离子浓度变化;将SKOV3细胞随机分为空白对照组、顺铂组、2-APB组和顺铂+2-APB组,分别处理24 h后,用倒置相差显微镜观察顺铂对SKOV3细胞形态的影响,用激光共聚焦显微镜观察细胞质内钙离子浓度变化;分别处理12 h后,采用Western blot检测Caspase-3、CHOP和GRP78蛋白表达.结果 MTT结果显示,3.5、7和14 μg/ml顺铂作用SKOV3细胞12和24h,SKOV3细胞存活率明显降低,作用12和24 h的IC50分别为(14.7 ±0.1)μg/ml和(6.6±0.1)μg/ml.激光共聚焦显微镜检测发现,随顺铂浓度及作用时间的增加,SKOV3细胞质游离钙离子浓度逐渐增加.顺铂与2-APB联合作用后,经倒置相差显微镜观察,与顺铂组比较,顺铂+2-APB组细胞密度明显增多.MTT结果显示,与顺铂组比较,顺铂+ 2-APB组细胞存活率由56.8％±0.9％上升至74.4％±1.0％,激光共聚焦显微镜检测发现,游离钙荧光点数由(58.4+0.2) ×103个降低至(23.8±0.3) ×103个,差异有统计学意义(P＜0.01).Western blot结果表明,与顺铂组比较,顺铂+ 2-APB组的Caspase-3、CHOP和GRP78蛋白表达显著降低,差异有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01).结论 细胞内钙离子参与调控顺铂诱导的SKOV3细胞凋亡.
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白英甾体皂苷组分诱导人卵巢癌细胞SKOV3凋亡的研究
目的:探讨白英甾体皂苷组分体外抑制人卵巢癌细胞(SKOV3)及诱导凋亡的作用.方法:MTT法测定SKOV3细胞体外增殖情况、姬姆萨-瑞氏染色观测形态学改变、通过流式细胞仪及Caspase-3和Caspase-9活化程度检测研究细胞凋亡及其途径.结果:白英甾体皂苷组分能显著抑制SKOV3细胞的体外增殖,诱导细胞凋亡及细胞周期阻滞,上调Caspase-3和Caspase-9的活性.
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AKT抑制剂MK-2206对卵巢癌SKOV3细胞增殖凋亡的影响
目的 探讨MK-2206对卵巢癌SKOV3细胞增殖凋亡的影响及其作用机制.方法 MTT法检测MK-2206和顺铂单药及联合用药对SKOV3细胞增殖的影响,并计算半抑制浓度(IC50);FCM法检测MK-2206和顺铂单药及联合用药对SKOV3细胞凋亡的影响;Western-Blot法检测各组丝苏氨酸蛋白激酶(AKT)、雷帕霉素靶体蛋白(mTOR)及核糖体S6蛋白激酶(70S6K)蛋白的表达情况.结果 MK-2206和顺铂两单药均可抑制SKOV3的增殖,各浓度组具有统计学差异(P<0.05),联合用药时可显著降低顺铂半抑制浓度(P<0.05);同时两单药组可促进SKOV3细胞凋亡(P<0.05),联合用药时凋亡作用更显著(P<0.05);MK-2206和顺铂对SKOV3细胞中AKT、m-TOR及70S6K表达无明显影响,但可抑制p-AKT、p-mTOR及p-70S6K表达水平(P<0.05).结论 MK-2206可抑制SKOV3细胞的增殖,促进其凋亡,并可增强SKOV3细胞对顺铂敏感性,其可能与抑制AKT、mTOR及70S6K磷酸化水平有关.
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4-HPR 联合顺铂对人卵巢癌细胞株 SKOV3增殖和 Akt／Bax 表达的影响
目的探讨4-HPR 联合顺铂对人卵巢癌细胞株 SKOV3增殖和 Akt/Bax 表达的影响。方法 MTT法检测单独使用4-HPR、顺铂及联合使用对SKOV3细胞增殖的影响；用流式细胞仪检测4-HPR、顺铂对SKOV3细胞周期和Akt/Bax表达的影响。结果顺铂联合不同浓度的4-HPR可以显著抑制SKOV3细胞的增殖，同单独使用顺铂相比抑制作用较强，差异显著（ P＜0.05）。顺铂联合4-HPR同使用顺铂相比可以使G0～G1期细胞比例进一步下降，S期和G2～M期细胞比例进一步上升，差异显著（ P＜0.01）。顺铂联合4-HPR的凋亡率同单独用顺铂组相比差异有统计学意义（ P＜0.01）。顺铂联合不同浓度的4-HPR时可以使SKOV3细胞Akt的表达下调和促进Bax的表达的上调，同单独使用顺铂相比差异有统计学意义（ P＜0.01）。结论顺铂联合4-HPR可以更好地抑制细胞株SKOV3增殖，使得细胞停滞在S期和G2～M期，这可能与可以促进Akt的表达下调和Bax的表达上调有关。
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GnRH激动剂Triptorelin对人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3生长抑制作用的研究
目的 观察GnRH受体在人卵巢癌细胞系SKOV3、OVCAR3中的表达,并研究GnRH激动剂(Triptorelin)对卵巢癌细胞生长的抑制作用.方法 采用免疫组化SP法检测两种细胞系内GnRH受体的表达,分别应用不同浓度Triptorelin作用于细胞,MTT法检测细胞生长抑制率.结果 人卵巢癌细胞系OVCAR3表达GnRH Ⅰ受体,SKOV3细胞系不表达GnRH Ⅰ受体,Trip-torelin可明显抑制GnRH Ⅰ受体阳性的OVCAR3细胞生长,对GnRH Ⅰ受体阴性的SKOV3细胞生长无明显抑制作用.结论 GnRH激动剂Triptorelin通过与人卵巢癌细胞株GnRH Ⅰ受体结合,发挥抗增殖的作用.
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Vandetanib对人卵巢癌细胞抑制作用机制探讨
目的 探讨Vandetanib对人卵巢浆液性乳头状腺癌细胞株SKOV3和卵巢癌顺铂耐药细胞株SKOV3/DDP的增殖抑制作用及其机制.方法 采用MTT法检测体外不同时间不同浓度的Vandetanib对SKOV3及SKOV3/DDP细胞的杀伤作用,计算半数抑制浓度(IC50);流式细胞术检测药物对细胞凋亡及其周期分布变化;采用蛋白质印迹法分析凋亡基因Bcl-2、Bax及反映肿瘤细胞侵袭力的基因MMP-2的蛋白表达变化.结果 与对照组相比,Vandetanib能明显抑制SKOV3和SKOV3/DDP生长,呈时间-剂量依赖性,IC50值均呈明显减小趋势.32 μmol/L的Vandetanib作用SKOV3和SKOV3/DDP 72 h后,抑制率分别为(43.21±0.92)％和(56.74±1.09)％,64μmol/L的Vandetanib作用SKOV3和SKOV3/DDP 72 h后,抑制率分别为(55.37±1.21)％和(79.20±0.39)％,耐药株SKOV3/DDP的抑制率明显高于敏感株SKOV3,差异有统计学意义,P＜0.05.流式细胞术结果显示,随时间浓度的增加,两种细胞凋亡明显增加,G1期细胞增加,S期和G2期细胞减少,差异有统计学意义,P＜0.05.蛋白印迹法结果显示,药物作用于SKOV3细胞株Bcl-2、MMP-2表达减少,Bax表达无明显变化;药物作用于SKOV3/DDP细胞株Bcl-2表达减少,Bax表达增加,耐药株不表达MMP-2.结论 Vandetanib对两种细胞株生长有明显的呈时间及浓度依赖性的抑制作用,可以诱导细胞凋亡并将细胞阻滞于G1期,其机制与下调Bcl-2/Bax、MMP-2表达有关,有利于降低卵巢癌细胞的侵袭力.
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米非司酮在抑制卵巢癌细胞紫杉醇耐药产生的作用
目的：探讨米非司酮在抑制卵巢癌细胞株skov3、A2780对紫杉醇耐药产生的作用。方法在紫杉醇诱导卵巢癌细胞株skov3、A2780的过程中,使用不同浓度米非司酮,应用免疫组化方法比较受不同浓度米非司酮作用的各组细胞株的P糖蛋白(p-glyco-protein, P-gp)的表达,同时检测各细胞的生长曲线。采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测各组细胞的半数致死浓度(IC50)；采用罗丹明123(Rh123)为荧光探针,使用流式细胞仪比较各株细胞的胞内Rh123含量。结果紫杉醇诱导卵巢癌耐药的过程中使用米非司酮,诱导后卵巢癌细胞株skov3、A2780中P-gp含量有所下降。结论米非司酮可抑制卵巢癌细胞紫杉醇耐药的产生。
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K9(C4H4FN2O2)2Ce(PW11O39)2·23H2O诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡作用机制的研究
目的阐述K9(C4H4FN2O2)2Ce(PW11O39)2·23H2O(FNdPW)诱导卵巢癌细胞SKOV3凋亡作用的机制.方法MTT 法检测细胞生长;吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)与电镜检测细胞形态;半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶(Caspase-3)活性试剂盒检测Casapse-3的变化;Western Blot法检测细胞中B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、多肽抗原(Bax)以及细胞色素C蛋白的表达.结果 FNdPW降低了卵巢癌SKOV3的细胞活力, IC50=3.56μmol/L.FNdPW能够使Bcl-2蛋白表达下调, 促凋亡蛋白Bax表达上调, 能够增加Caspase-3的活性, 同时使细胞色素C表达上调.结论FNdPW通过促进卵巢癌细胞系SKOV3的凋亡, 从而引起细胞增殖下降, 导致细胞死亡.为FNdPW可成为临床卵巢癌患者的有效治疗药物提供了实验依据.
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中药复方药物血清对FADD和MCL -1基因在人卵巢癌细胞株SKOV3中表达的影响
目的 研究FADD和MCL -1基因在中药复方理冲生髓饮诱导人卵巢癌细胞株SKOV3细胞凋亡中的作用.方法 Wistar大鼠随机分组,灌胃给药,采血制备含药血清.提取生理盐水组及理冲生髓饮组肿瘤细胞mRNA,制备DNA探针并分别用Cy3和Cy5两种荧光染料标记,与人细胞凋亡寡核苷酸微阵列芯片进行杂交,经扫描、分析,得出药物作用后表达有差异的基因.结果 共筛选出显著表达差异基因66种,其中20种基因表达水平上调,46种基因表达水平下调.结论 理冲生髓饮能够抑制细胞增殖并诱导其凋亡,其细胞凋亡机制与上调FADD基因和下调MCL -1基因有关.
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拉帕替尼联合顺铂对人卵巢癌细胞SKOV3生长的影响
目的 探讨新型靶向治疗药物拉帕替尼联合顺铂(DDP)对人卵巢腺癌细胞株SKOV3的增殖抑制作用以及对磷酸AKT蛋白表达的影响.方法 体外培养人卵巢癌细胞株SKOV3,采用MTT方法检测不同浓度拉帕替尼、DDP单用或者合用对细胞增殖活力的改变:用流式细胞仪进行细胞周期分析；用流式细胞仪检测SKOV3应用拉帕替尼前后磷酸化AKT(P-AKT)蛋白的表达.结果 拉帕替尼及顺铂单独使用即对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞有增殖抑制作用,不同浓度的拉帕替尼与顺铂联合应用对人卵巢癌细胞株SKOV3细胞的增殖抑制作用较单药组增强(P＜0.05),与对照组相比有统计学意义(P＜0.05)；应用拉帕替尼前后P-AKT蛋白的表达有显著不同(P＜0.05).结论 拉帕替尼联合顺铂可显著抑制SKOV3细胞株的增殖,其作用可能与P-AKT的表达有关,为其在卵巢癌上的应用提供了新的靶点和一定的理论基础.
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白藜芦醇对体外卵巢癌SKOV3细胞增殖及荷卵巢癌裸小鼠移植瘤生长的抑制作用
目的 研究白藜芦醇(Resveratrol,Res)对体外人上皮性卵巢癌SKOV3细胞增殖及荷卵巢癌裸小鼠移植瘤生长的抑制作用及其机制.方法 将对数生长期的人上皮性卵巢癌SKOV3细胞随机分为空白组,白藜芦醇40,20,10 μg/mL干预组和顺铂40 μg/mL干预组.干预48 h后,通过光学显微镜观察各组细胞形态,四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测各组细胞增殖抑制率;通过流式细胞术检测细胞凋亡情况并计算凋亡率.采用右侧背部皮下注射接种人上皮性卵巢癌SKOV3细胞的方法制备荷人上皮性卵巢癌裸小鼠模型,将50只造模成功小鼠随机分为模型组,白藜芦醇200,100,50 mg/kg组和顺铂组,模型组灌胃生理盐水,各给药组灌胃相应药物,隔天1次.灌胃5次后处死动物取肿瘤组织,称瘤质量并计算抑瘤率;通过HE染色观察肿瘤组织病理形态学变化;通过免疫组织化学法观察肿瘤组织中bcl-2、bax、caspase-3蛋白表达情况并进行半定量分析,计算bax/bcl-2比值.结果 在体外,白藜芦醇呈剂量依赖性抑制人上皮性卵巢癌SK-OV3细胞增殖,且白藜芦醇40 μg/mL干预组细胞增殖抑制率和凋亡率均高.在体内,白藜芦醇200,100 mg/kg组和顺铂组瘤质量显著低于模型组(P均＜0.05),且白藜芦醇各组抑瘤率呈剂量依赖性升高(P均＜0.05);顺铂组和白藜芦醇200,100 mg/kg组肿瘤组织中bcl-2表达量明显低于模型组(P均＜0.05),caspase-3表达量明显高于模型组(P均＜0.05);各给药组bax表达量和bax/bcl-2比值均明显高于模型组(P均＜0.05).结论 白藜芦醇对体外人上皮性卵巢癌SKOV3细胞增殖和荷卵巢癌裸小鼠移植瘤生长均具有抑制作用,其作用机制可能与白藜芦醇能够有效下调bcl-2蛋白表达、上调bax和caspase-3蛋白表达、提高bax/bcl-2比值有关.
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人卵巢癌细胞中IL-18、ICE的基因及蛋白表达分析
目的 从基因转录及蛋白表达水平检测白细胞介素18(IL-18)、白细胞介素1β转化酶(ICE)在人卵巢癌细胞株SKOV3和3AO中的表达.方法 分别采用RT-PCR及免疫细胞化学染色法检测SKOV3和3AO中IL-18、1CE的mRNA及蛋白表达.结果 SKOV3和3AO中IL-18 mRNA及蛋白表达均阳性,其中SKOV3的mRNA表达量显著高于3AO(分别为0.32±0.09、0.17±0.04,P=0.009);而ICE mRNA及蛋白表达均阴性.结论 人卵巢癌细胞株SKOV3和3AO在基因及蛋白水平表达IL-18,但缺如ICE表达的特点,可能与卵巢癌的发生发展有一定的关系.
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microRNA-145对卵巢癌SKOV3细胞抑癌基因p53表达调控研究
目的 探讨microRNA-145(miR-145)对卵巢癌SKOV3细胞抑癌基因p53表达的调控.方法 选取2012年2月至2013年4月在重庆医科大学,通过慢病毒转染技术将含miR-145的质粒转入SKOV3细胞中,经嘌呤霉素筛选建立稳定表达miR-145的SKOV3细胞株.实时定量荧光RT-PCR验证miR-145的表达情况,western-blot检测过表达miR-145后SKOV3细胞中p53蛋白表达量的变化.结果 过表达miR-145的SKOV3细胞p53蛋白相对表达量实验组0.714±0.18,对照组0.333±0.07,增高114倍(P＜0.05).结论 miR-145可能通过增强卵巢癌SKOV3细胞中抑癌基因p53的表达来降低细胞的肿瘤恶性程度.
关键词： microRNA-145 卵巢肿瘤 SKOV3 P53 -
中药复方药物血清对BID和CTNNB1基因在人卵巢癌细胞株SKOV3中表达的影响
目的:研究BID和CTNNB1基因在中药复方理冲生髓饮诱导人卵巢癌细胞株SKOV3细胞凋亡中的作用.方法:Wistar大鼠随机分组,灌胃给药,采血制备中药复方药物血清.提取对照组及理冲生髓饮组肿瘤细胞mRNA,制备DNA探针并分别用Cy3和Cy5两种荧光染料标记,与人细胞凋亡寡核苷酸微阵列芯片进行杂交,经扫描、分析得出药物作用后表达有差异的基因.结果:共筛选出显著表达差异基因66种,其中20种基因表达水平上调,46种基因表达水平下调.结论:理冲生髓饮可能通过上调BID基因和下调CTNNB1基因达到诱导细胞凋亡、抑制转移及增加化疗敏感性的目的.
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利用基因芯片技术阐述中药复方对卵巢癌细胞株SKOV3的作用机制
目的:研究理冲生髓饮对人卵巢浆液性乳头状囊腺癌细胞株SKOV3的治疗作用,并利用基因表达谱芯片探索其作用机制.方法:wistar大鼠随机分组,灌胃给药,采血制备含药血清.提取对照组及理冲生髓饮组肿瘤细胞mRNA,制备DNA探针并分别用Cy3和Cy5两种荧光染料标记,与基因表达谱芯片进行杂交,经扫描、分析,得出药物作用后表达有差异的基因.结果:共筛选出显著表达差异基因136种,其中16种基因表达水平下调,120种基因表达上调.结论:理冲生髓饮对SKOV3生长有抑制作用.
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半枝莲含药血清对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响
目的:探讨半枝莲含药血清对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响及其机制.方法:体外常规培养人卵巢癌SKOV3细胞,倒置显微镜下观察半枝莲含药血清作用后SKOV3细胞形态的改变,MTT法检测细胞增殖抑制率,应用流式细胞技术检测细胞周期及凋亡率.结果:与空白对照组比较,给药后细胞状态变差,形态和贴壁情况等发生改变.半枝莲含药血清可有效抑制SKOV3细胞生长,低、中、高剂量组抑制率呈递增趋势,同剂量组24 h、48 h、72 h抑制率递增.流式细胞仪检测结果显示,与空白对照组比较,半枝莲含药血清组G0/G1期细胞所占比例增多,空白对照组、半枝莲含药血清低、中、高剂量组48 h细胞凋亡率分别为7.94％、8.36％、17.82％、21.12％.结论:半枝莲含药血清对人卵巢癌SKOV3细胞的增殖有抑制作用,其机制与影响细胞周期和诱导细胞凋亡有关.
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卵巢上皮性癌细胞系来源肿瘤干细胞的免疫特性研究
目的:探讨卵巢上皮性癌细胞系(SKOV3)来源肿瘤干细胞的免疫特性.方法:通过干细胞特异性标记物乙醛脱氢酶1ALDH1表达鉴定富集肿瘤干细胞(CSCs)的球状细胞(SDC).将富集CSCs的SDC与相应的贴壁培养的普通卵巢癌细胞(MDC)进行比较.通过Transwell法(细胞侵袭试验)检测SDC和MDC对于T细胞增殖以及分泌功能的影响.RT-PCR检测SDC以及MDC免疫抑制基因表达情况.结果:以球体细胞形成方法获得的CSC富集SDC群比MDC表现出更高比例的ALDH1表达.将T细胞分别与SDC和MDC共培养,SDC组T细胞增殖率显著低于MDC组.MDC共培养的T细胞分泌IFN-γ、IL-2水平明显高于与SDC共培养的T细胞(P＜0.05).SDC表达免疫抑制基因ArginaseⅡ、IDO、IL-8、TGF-β水平明显高于MDC,以ArginaseⅡ、IL-8的上调为明显(P＜0.05).结论:球体细胞形成试验是获得卵巢肿瘤干细胞的可靠方法.在卵巢上皮性癌细胞系(SKOV3)中,CSCs比普通肿瘤细胞表现出更强大的免疫抑制性,这可能是妨碍免疫治疗的免疫逃逸机制.
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半枝莲黄酮类单体对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的影响
目的 探讨半枝莲5个黄酮类单体(汉黄芩素、野黄芩苷、芹菜素、木犀草素和黄芩素)及与卡铂联用对人卵巢癌SKOV3细胞增殖抑制的影响.方法 应用MTT法检测半枝莲5个黄酮类单体对SKOV3细胞增殖的抑制能力,根据IC50筛选抑制能力强的单体；光学显微镜下观察梯次浓度的筛选单体和卡铂对SKOV3细胞的形态学影响；采用MTT、凋亡试剂检测筛选单体与卡铂联用对SKOV3细胞增殖的抑制和凋亡的影响.结果 与阴性对照组比较,半枝莲5个黄酮类单体可明显抑制SKOV3细胞增殖,差异有统计学意义(P＜0.05),除芹菜素呈拱形变化趋势外,其余单体抑制作用均呈浓度依赖性,其中汉黄芩素48 h的IC50值低.梯次浓度的汉黄芩素作用48 h后细胞形态渐呈松针样改变,而卡铂渐呈圆形或碎片状.汉黄芩素与卡铂联用对SKOV3细胞增殖的抑制作用明显优于卡铂组(P＜0.01),呈时间依赖性；且细胞凋亡较卡铂组明显增多.结论 半枝莲5个黄酮类单体对SKOV3细胞增殖均具有明显抑制作用,其中汉黄芩素作用强.汉黄芩素可增强卡铂的细胞毒作用.
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华山松松塔提取物对人白血病、卵巢癌细胞增殖的影响
目的 研究华山松松塔提取物体外对人慢性粒细胞白血病细胞(K562)、卵巢癌细胞(SKOV3)的影响.方法 采用MTT法,观察华山松松塔提取物对K562细胞、SKOV3细胞增殖的影响.结果 48 h,华山松松塔不同溶剂提取物在1 000μg/mL时,对K562细胞、SKOV3细胞均有抑制作用(P＜0.05);72 h,华山松松塔石油醚提取物高剂量下(1 000 μg/mL)对SKOV3细胞无抑制作用,但对K562细胞有抑制作用(P＜0.05);氯仿、乙酸乙酯、正丁醇提取物在高剂量下均对K562细胞、SKOV3细胞有抑制作用(P＜0.05).结论 华山松松塔氯仿、正丁醇、乙酸乙酯提取物均具有抑制人慢性粒细胞白血病细胞、人卵巢癌细胞增殖的作用.
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RNA干扰对Aurora-A在人卵巢癌细胞中表达及细胞增殖的影响
目的: 探讨应用RNA干扰技术沉默Aurora-A基因表达,研究其对人卵巢癌SKOV3细胞增殖的抑制作用.方法: 设计合成两对特异性针对Aurora-A基因的Oligo siRNA,转染至SKOV3细胞中,采用RT-PCR和Western blot检测Aurora-A mRNA和蛋白表达情况,同时利用MTT试验和流式细胞仪观察转染后细胞增殖抑制和凋亡情况.结果:转染Oligo siRNA后,SKOV3细胞Aurora-A mRNA表达受抑制(P《0.01),蛋白表达水平降低;细胞增殖的抑制率和细胞凋亡率明显增高(P《0.05, P《0.01).结论: 体外合成的特异性针对Aurora-A基因的Oligo siRNA对卵巢癌细胞株SKOV3中Aurora-A基因表达和细胞增殖均有明显抑制作用,为进一步研究Aurora-a基因的功能提供了实验基础.
