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热休克蛋白20与高尔基体在沙鼠前脑缺血再灌注后的变化及相关性
[目的]探讨在沙鼠脑缺血再灌注模型中,热休克蛋白20(HSP20)的表达变化及可能的神经保护作用和作用机制,检测高尔基体特异性标记物38( TGN38)的表达变化及HSP20与高尔基体的定位关系.[方法]通过夹闭双侧颈总动脉的方法建立沙鼠脑缺血再灌注模型；60只沙鼠随机分为正常对照组、假手术组、缺血再灌注组(I/R).缺血再灌注组在缺血再灌注后6h、1d、3d、7d的各时间点分批处死动物,快速取脑组织,分别制作石蜡标本和提取蛋白,采用HE染色观察皮质区神经细胞变化；采用免疫组织化学方法检测皮质区HSP20阳性细胞数目；采用免疫荧光共聚焦的方法观察脑皮质细胞中HSP20与高尔基体的定位情况.采用免疫印迹技术,观察高尔基体及HSP20蛋白表达变化情况；全部数据用SPSS 16.0进行统计分析.[结果]HE染色:正常对照组和各假手术组的脑组织形态结构没有明显差异；L/R组根据时间点的不同可见胶质细胞增生、肥大,细胞间质和细胞水肿,神经元坏死.免疫组化染色HSP20的表达:正常对照组和各假手术组的脑组织中均有HSP20的表达,但表达较低.缺血再灌注损伤后HSP20的表达上调,于3d达到高峰,7 d开始下降但仍高于正常组和假手术组(与正常组和各假手术组比较,P＜0.05,不同时间点比较,P＜0.05).免疫荧光共聚焦:TGN38的免疫荧光及HSP20的免疫荧光在蒙古沙鼠皮质细胞内明显重叠.免疫印迹结果:我们通过免疫印迹的方法再次证实了在沙鼠前脑缺血再灌注后HSP20后的表达变化(变化趋势同免疫组化结果).而TGN38在正常对照组、假手术组及缺血再灌注各组的表达无明显差异.[结论](1)HSP20在缺血再灌注的脑组织中表达升高并可能发挥神经保护作用.(2)在沙鼠皮质细胞内,HSP20存在于高尔基体,表明HSP20的靶向运输依赖高尔基体,同时HSP20可能对高尔基体具有重要保护作用.
关键词： HSP20热休克蛋白质类 高尔基体 沙鼠亚科 -
外源性硫化氢对脑缺血再灌注大鼠神经功能的作用及其机制探讨
目的 探讨外源性硫化氢对脑缺血再灌注大鼠神经功能的作用及其机制.方法 将240只雄性SD大鼠通过随机数字表法分为4组:假手术组,模型组,小剂量NaHS(3.2 mg/kg)组,大剂量NaHS(6.4 mg/kg)组,每组60只,线栓法制备大鼠大脑中动脉栓塞模型,2h后再灌注,灌注前20 min给予生理盐水或NaHS腹腔注射,术后不同时间点行神经功能缺损评分,四氮唑红染色观察脑梗死体积,免疫组化和Western印迹检测缺血周边区肿瘤坏死因子-α(TNF-α)与热休克蛋白20(HSP20)表达.结果 模型组各时间点均有明显的神经功能缺损症状,NaHS干预后神经功能缺损改善(P＜0.05),脑梗死体积减少(P＜0.05)；局灶性脑缺血再灌注后HSP20和TNF-α在再灌注6 h～7d在缺血周边区神经元表达增加,与假手术组相比,HSP20表达量显著增加,灰度值分别为3.51±0.72、5.13 ±0.41、7.52±1.31、3.48 ±0.87(均P＜0.05),TNF-α表达量也显著增加,灰度值分别为0.74±0.13、1.13 ±0.19、0.87±0.26(均P＜0.05)、0.19 ±0.03(P ＞0.05).应用外源性硫化氢,脑缺血再灌注后各时间点HSP20表达均升高,大剂量组灰度值为4.41 ±0.61、7.56±0.35、10.3±1.03、3.92±1.09(均P＜0.05),TNF-α表达均降低,大剂量组灰度值为0.31±0.16、0.44±0.18、0.26±0.13、0.19±0.05(均P＜0.01)；干预组以大剂量NaHS组治疗效果更明显(P＜0.05).结论 NaHS可能通过诱导HSP20表达上调,抑制TNF-α表达,起到抗炎作用,减少脑梗死体积,从而起到神经保护作用.
关键词： 硫化氢 脑 再灌注损伤 肿瘤坏死因子α HSP20热休克蛋白质类 -
丹红注射液对大鼠脑缺血再灌注损伤后Hsp20表达的影响
【目的】探讨丹红注射液干预大鼠脑缺血再灌注损伤后热休克蛋白（Hsp ）20表达及意义。【方法】104只SD大鼠随机分为：8只正常对照（C组），未做任何处理；缺血再灌注损伤48只（I／R组），丹红注射液干预48只（DI／R组）。I／R组与DI／R组均采用大脑中动脉闭塞方法制作大鼠脑缺血再灌注模型，DI／R组从实验前一天开始腹腔注射丹红注射液（8 mL／kg ，Qd），直到各时间点（脑缺血2h再灌注后6h、24h、48h、72h、7d，每个时间点8只）处死，I／R组与DI／R组相同时间点注射生理盐水。比较I／R组与DI／R组脑梗死体积和各时间点神经功能缺损评分和 Hsp20阳性细胞数。【结果】I／R组脑梗死体积为（105．11±10．60）mm3，显著高于DI／R组（82．16±7．02）mm3，其差异有统计学意义（ P ＜0．05）。I／R组脑缺血再灌注后6 h神经功能缺损评分与DI／R组比较无显著性差异（P＞0．05），而在24h、48h、72h、7d时，I／R组的神经功能缺损评分显著高于DI／R组（P＜0．05），DI／R组缺血再灌注时间越长，神经功能缺损评分越低。正常对照组神经细胞中Hsp20阳性细胞很少；I／R组 Hsp20的表达6 h开始随时间增加，在72 h Hsp20表达达到高峰，7 d表达陡然减少；DI／R组 Hsp20阳性细胞数趋势同I／R组，且均显著高于I／R组相应的各时间点阳性细胞数（ P ＜0．05）。【结论】大鼠脑缺血再灌注损伤后丹红干预，其大鼠Hsp20的表达增加，脑缺血后损伤程度减轻。
