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顺铂对荷瘤鼠髓源性抑制细胞的选择性下调作用
目的：通过观察不同剂量的顺铂（Cisplatin，DDP）对B16黑色素瘤荷瘤鼠髓源性抑制细胞（myeloid-derived suppressor cells，MDSCs）的下调作用，探讨介导DDP免疫调节作用的机制。方法建立C57BL/6鼠B16黑色素瘤模型，随机分为三组：生理盐水（normal saline，NS）组：予NS；DDP 2.5 mg/kg组：予DDP 2.5 mg/kg，ip；DDP 5 mg/kg组：予DDP 5 mg/kg，ip。流式细胞术检测DDP处理后荷瘤鼠肿瘤组织、外周血中MDSCs、CD3＋T细胞及自然杀伤（natural killer，NK）细胞比例的变化。绘制肿瘤生长曲线比较不同剂量的DDP对细胞因子诱导的杀伤细胞（cytokine-induced killer cells，CIK cells）抑瘤作用的增效作用。结果 DDP可显著降低肿瘤组织中MDSCs的比例（P＜0.05），而对外周血中CD3＋T细胞及NK细胞的比例无显著作用；两种剂量的DDP（2.5 mg/kg vs.5 mg/kg）对MDSCs的下调作用无显著差异。DDP预处理可显著增强CIK细胞对B16黑色素瘤的抑制作用（P＜0.05）；此种增效作用在DDP的两种剂量组（2.5 mg/kg vs.5 mg/kg）间无统计学差异。结论在B16黑色素瘤模型中，DDP预处理可增强CIK细胞免疫治疗的疗效，且此种增效作用与DDP选择性下调肿瘤组织中MDSCs的比例相关。
关键词： 预处理化疗 细胞因子诱导的杀伤细胞 免疫调节 髓源性抑制细胞 -
化疗药物对肿瘤细胞免疫原性的调变作用
目的 观察化疗药物对肿瘤细胞免疫原性的调变作用,探讨介导预处理化疗增效作用的机制.方法 MTT法筛选化疗药物5-氟尿嘧啶(5- Fluorouracil,5- FU)、顺铂(Cisplatin,DDP)、紫杉醇(Paclitaxel,PTX)、多西紫杉醇( Docetaxel,DTX)的体外高、中、低毒性浓度,将这些浓度的化疗药物处理人肺腺癌细胞(A549、SPC - A1、SPC - A1/DTX),WST -1法比较肿瘤细胞在化疗药物预处理前后对CIK细胞体外杀伤作用的敏感性.RT - PCR检测肿瘤细胞经化疗药物处理后各时间点免疫原性分子mRNA水平表达的改变:NKG2D配体(natural killer group 2,member D ligands,NKG2DL)、Fas受体分子、细胞间黏附分子-1(intercellular adhesion molecule -1,ICAM -1)、高迁移率族蛋白1(high - mobility group box -1,HMGB -1)、钙网织蛋白(calreticulin,CRT)、DNAM分子( DNAX accessory molecule -1)、Clr -b分子(C- type lectin - related molecule b).结果 化疗药物预处理可增加人肺腺癌细胞对CIK细胞体外杀伤作用的敏感性,介导化疗药物增敏作用的机制包括上调人肺腺癌细胞ULBP、Fas、ICAM -1及DNAM分子mRNA水平的表达及下调Clr -b分子mRNA水平的表达.结论 化疗药物预处理可通过调变人肺腺癌细胞的免疫原性增加其对CIK细胞体外杀伤作用的敏感性.
关键词： 预处理化疗 细胞因子诱导的杀伤细胞 免疫原性 -
预处理化疗:重燃过继性细胞免疫治疗的希望之光
过继性细胞免疫治疗(adoptive cell immuno therapy,ACIT)通过分离自体或供体来源的免疫细胞进行体外活化和扩增,随后输注至肿瘤患者体内发挥抗肿瘤作用[1],是肿瘤生物治疗中研究活跃的领域.1985年,Rosenberg将淋巴因子激活的杀伤细胞( lymphokine - activated killer cells,LAK cells)引入黑色素瘤的治疗,开创了肿瘤ACIT的先河[2],其后,肿瘤浸润淋巴细胞(tumor-infiltrating lymphocytes,TIL)[3]、细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine-induced killer cells,CIK cells)[4]等多种免疫效应细胞相继进入临床试验.但与当初人们寄予的期望相比,无论何种类型的ACIT,尽管其具备理论上的优势,且在体外可以发挥强大的抗肿瘤作用,但将其应用于临床回输至肿瘤患者体内时疗效却非常有限.现有研究结果表明,这一现象与肿瘤及机体的免疫抑制性因素有关[5,6].
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顺铂以T细胞依赖性方式增强ClK细胞的抗肿瘤作用
目的 观察顺铂预处理化疗联合细胞因子诱导的杀伤细胞( cytokine - induced killer cells,CIK cells)对小鼠CT - 26结肠癌的抑制作用,并探讨介导顺铂免疫调节效作用的机制.方法 分别建立BALB/c野生鼠或BALB/c nu/nu裸鼠CT - 26结肠癌模型,以顺铂(Cisplatin,DDP)作为预处理方案.荷瘤小鼠随机分为四组:对照组(给予生理盐水,normal saline,NS)、CIK组(给予CIK细胞)、DDP组(给予DDP方案)、DDP - CIK组(DDP方案预处理后联合CIK细胞),隔日测量肿瘤长短径监测肿瘤体积.分离小鼠肿瘤组织,分别行CD3、FoxP3( Forkhead box P3)、CD31分子免疫组化染色以评估肿瘤组织局灶T淋巴细胞、Treg细胞的浸润情况以及肿瘤微血管密度的变化.流式细胞术观察DDP预处理化疗后荷瘤鼠脾脏组织中调节性T细胞(regulatory T cells,Treg cells)的动态变化.结果 在BALB/c野生鼠CT - 26结肠癌模型中,单独CIK免疫治疗或DDP化疗均可明显抑制CT - 26结肠癌的生长(P＜0.05),而DDP预处理化疗联合CIK细胞免疫治疗与单独化疗组相比,可显著的抑制CT - 26结肠癌的生长(P＜0.05).在BALB/c裸鼠CT - 26结肠癌模型中,DDP预处理化疗联合CIK细胞免疫治疗、单独CIK治疗及单独DDP化疗均不能抑制CT - 26结肠癌的生长(P＞0.05).DDP预处理化疗均可促进CD3+T淋巴细胞至肿瘤局灶的浸润,下调肿瘤局灶及脾脏组织中Treg细胞的比例,而对肿瘤组织的微血管密度无明显作用.结论 DDP预处理化疗以T细胞依赖性方式增强CIK细胞对CT - 26结肠癌的抑制作用.
关键词： 预处理化疗 细胞因子诱导的杀伤细胞 免疫调节 调节性T细胞 -
预处理化疗增强CIK细胞对Lewis肺癌的抑制作用
目的 观察预处理化疗在小鼠Lewis肺癌模型中对细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine - induced killer cells,CIK cells)的抗肿瘤活性的增强作用,并探讨介导此增效作用的机制.方法 建立C57BL/6小鼠Lewis肺癌模型,以紫杉醇( Paclitaxel,PTX)联合顺铂(Cisplatin,DDP)作为预处理方案(TP方案),将荷瘤小鼠随机分为四组:对照组(给予生理盐水,normal saline,NS)、CIK组(给予CIK细胞)、TP组(给予TP方案)、TP - CIK组(TP方案预处理后联合CIK细胞).隔日测量肿瘤长短径监测肿瘤体积,观察各组治疗方案对Lewis肿瘤的抑制作用.分离小鼠肿瘤组织,分别行CD3、FoxP3( Forkhead box P3)分子免疫组化染色以评估肿瘤组织中T淋巴细胞、Treg细胞的浸润情况.利用绿色荧光蛋白(green fluorescence protein,GFP)转基因小鼠制备GFP+ CIK细胞,荧光显微镜追踪其体内迁移分布,观察预处理化疗对CIK细胞体内归巢功能的影响.结果 TP预处理化疗联合CIK细胞可明显抑制Lewis肺癌的生长(P＜0.05),而单独CIK细胞免疫治疗或TP化疗均不能抑制Lewis肿瘤的生长(P＞0.05).TP预处理化疗可增加CD3+T淋巴细胞至肿瘤组织的浸润,下调肿瘤组织中Treg细胞的比例,促进CIK细胞至肿瘤及脾脏组织的归巢.结论 TP预处理化疗可增强CIK细胞对Lewis肺癌的抑制作用,为TP预处理化疗联合CIK细胞免疫治疗的临床应用提供了实验基础与理论依据.
关键词： 预处理化疗 细胞因子诱导的杀伤细胞 免疫调节 调节性T细胞 -
顺铂预处理化疗通过免疫调节增强CIK细胞对B16恶性黑色素瘤的抑制作用
目的 观察顺铂( Cisplatin,DDP)预处理化疗联合CIK细胞对B16恶性黑色素瘤的抑制作用,探讨DDP预处理化疗增强细胞因子诱导的杀伤细胞(cytokine - induced killer cells,CIK cells)抑瘤作用的潜在机制.方法 建立C57BL/6小鼠B16黑色素瘤模型,测量肿瘤体积,绘制肿瘤生长曲线；免疫组化观察肿瘤组织调节性T细胞(regulatory T cells,Treg cells)的浸润；流式细胞术观察DDP预处理化疗对CIK归巢至肿瘤引流淋巴结(tumor draining lymph nodes,TDLN)、肿瘤组织的动态影响、树突状细胞(dendritic cells,DC)、髓系来源抑制细胞(myeloid - derived suppressor cells,MDSC cells)的动态变化.结果 DDP预处理化疗联合CIK细胞显著抑制B16恶性黑色素瘤的生长(P＜0.05); DDP预处理化疗减少肿瘤组织中Treg细胞的浸润；增强CIK细胞归巢至肿瘤引流淋巴结、肿瘤组织的能力；增加骨髓、外周血及脾脏组织中DC的比例(P＜0.05)；降低外周血、骨髓、脾脏组织及TDLN中MDSC的比例(P＜0.05).结论 顺铂预处理化疗可通过免疫调节增强CIK细胞对B16恶性黑色素瘤的抑制.
关键词： 预处理化疗 细胞因子诱导的杀伤细胞 调节性T细胞 树突状细胞 髓系来源抑制细胞
