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趋化因子CCL18对前列腺癌细胞迁移力、侵袭力和细胞增殖影响的研究
目的：研究趋化因子CCL18对前列腺肿瘤细胞侵袭力、迁移力和细胞增殖的影响。方法通过培养前列腺肿瘤细胞LNCaP、DU145，并加入趋化因子蛋白CCL18，利用Transwell实验、Wound Healing实验和CCK8试剂盒来分别检测CCL18对前列腺肿瘤细胞侵袭力、迁移力及对细胞增殖的影响。结果经过趋化因子蛋白CCL18处理的前列腺肿瘤细胞，在Transwell实验中，肿瘤细胞跨膜细胞数显著增加（LNCaP：对照vs. CCL18=202.0±18.5vs.279.7±27.6；DU145：对照vs. CCL18=60.3±6.5vs.91.0±9.5）；Wound Healing实验中，肿瘤细胞发生迁移的数量明显增加（LNCaP：对照vs. CCL18=127.3±14.3vs.214.4±30.9；DU145：对照vs. CCL18=68.6±15.8vs.129.4±12.0）；细胞生长实验结果揭示肿瘤细胞增殖速度也显著加快。结论趋化因子蛋白CCL18能促进前列腺肿瘤细胞LNCaP、DU145的侵袭力、转移力，并加快前列腺肿瘤细胞的生长速度。
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当归补血汤对循环内皮祖细胞功能及Bcl-2表达的影响
目的 观察当归补血汤对人循环内皮祖细胞(EPCs)功能及B细胞淋巴瘤/白血病-2基因(Bcl-2)表达的影响.方法 分离培养人外周血单个核细胞,7d后对贴壁细胞行EPCs鉴定后,将EPCs随机分为6组:空白组、对照组、辛伐他汀组、当归补血汤高、中、低浓度组.空白组用不合血清的培养液培养;对照组用0.2％的牛血清白蛋白培养;辛伐他汀组用0.1 μmol/L的辛伐他汀培养;当归补血汤高、中、低浓度组分别用浓度4、2、1 g/L的当归补血汤培养.各组培养24 h后移去上清,加入不含血清的培养液继续培养24 h.采用四唑盐(MTT)法检测细胞增殖力,黏附实验检测黏附力,迁移小室检测迁移力,体外血管生成试剂盒检测成小管力,RT-PCR法检测Bc1-2 mRNA表达,蛋白免疫印迹法检测Bc1-2蛋白的表达.结果 当归补血汤高浓度组及辛伐他汀组可显著促进EPCs的各项功能并上调细胞Bcl-2 mRNA的表达(P＜0.05);当归补血汤中、低浓度组对EPCs的增殖、迁移及成小管功能具有促进作用,但对细胞黏附力和Bcl-2 mRNA表达无明显影响;当归补血汤高、中、低浓度组及辛伐他汀组均可上调EPCs Bcl-2蛋白的表达(P＜0.05).结论 当归补血汤可通过上调Bcl-2的表达来促进循环EPCs的功能.
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丙戊酸钠对骨髓瘤细胞DAP-K基因去甲基化及迁移、侵袭力影响的实验研究
目的 本研究探讨丙戊酸钠(valproic acid sodium,VPA)体外对骨髓瘤RPMI 8226细胞株死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase,DAP-K)基因去甲基化的作用及对其迁移、侵袭力的影响.方法 丙戊酸钠组(1、2、4μmol/L)、PBS组、阴性对照组作用RPMI 8226细胞株24、72h后进行试验,MSP法检测各组骨髓瘤细胞处理前后DAP-K基因甲基化状态,半定量RT-PCR方法检测DAP-K基因表达,transwell迁移及matrigel侵袭试验分别检测丙戊酸钠对RPMI 8226细胞迁移及侵袭能力的影响,并对VPA处理后细胞DAP-K基因表达情况及其迁移及侵袭能力行相关性分析.结果 ①丙戊酸钠组2、4μmol/L在VPA作用72h后RPMI 8226细胞其DAP-K启动子有去甲基化表现；②丙戊酸钠组2、4μ.mol/L在VPA作用72h后DAP-K基因mRNA表达量增加；③2、4μmol/L丙戊酸钠处理后RPMI 8226细胞迁移能力及侵袭力较PBS组及阴性对照组降低,有统计学差异(P＜0.05)；④VPA处理后RPMI 8226细胞DAP-K基因表达情况及其迁移及侵袭能力呈负相关.结论 丙戊酸钠可诱导骨髓瘤细胞株RPMI 8226细胞DAP-K基因启动子去甲基化,使DAP-K基因重新表达,并使迁移能力及侵袭力下降；VPA处理后RPMI 8226细胞DAP-K基因表达情况与其迁移与侵袭能力呈负相关.
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沙门菌介导骨桥蛋白siRNA对Tca 8113细胞体外生长的影响
目的:研究应用减毒沙门菌感染性转基因骨桥蛋白siRNA(OPNsiRNA)抑制Tca 8113细胞生长和转移的可行性和作用.方法:人工合成OPNsiRNA,同时,合成无义ControlsiRNA作为对照,进行以下平行试验;合成siRNA,分别构建表达载体pIRES2-EGFP,转染减毒沙门菌SL7207,获得的重组菌SL-OPNsiRNA和SL-ControlsiRNA分别体外感染Tca 8113细胞,观察细胞感染率及对细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭力的影响,同时以Western印迹检测转基因OPNsiRNA对细胞内源性OPN、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和尿激酶型纤溶酶原激活因子(uPA)蛋白表达的影响.采用SPSS15.0软件包进行组间t检验.结果:重组减毒沙门菌感染Tca 8113的效率可达80.0%以上,两者之间无显著差异(P>0.05);OPNsiRNA可显著抑制Tca 8113细胞的生长和诱导凋亡;感染后24h,细胞OPNsiRNA和ControlsiRNA的迁移指数分别为0.56±0.10和0.82±0.05,侵袭力指数分别为0.53±0.13和0.83±0.06,2组之间均存在显著差异(n=12,P<0.01);同时.OPNsiRNA感染可显著降低细胞内OPN、MMP-2和uPA蛋白的表达量.结论:携带OPNsiRNA的减毒沙门菌可有效通过细菌感染方式,转入舌癌细胞,发挥抗肿瘤生长和转移的作用.
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靶向S100A4的shRNA对乳腺癌MCF-7细胞体外侵袭力及迁移力的影响
目的 探讨靶向S100A4短发夹RNA(shRNA)对MCF-7细胞侵袭力和迁移力影响的作用机制.方法 构建S100A4基因特异性shRNA表达载体,使用QRT-PCR和Western blot检测转染后MCF-7细胞中S100A4的表达水平,经过脂质体介导将S100A4-shRNA表达载体转染入MCF-7细胞,G418筛选及克隆化培养.采用Trans- well小室法和划痕试验检测MCF-7细胞侵袭力和迁移力变化.结果 经测序鉴定证实S100A4-shRNA表达载体成功构建.转染48 h后,所构建的S100A4-shRNA-1表达载体能有效抑制MCF-7细胞中S100A4表达;MCF-7细胞形态无显著变化,但侵袭力和迁移力明显下降.结论 S100A4在乳腺癌细胞侵袭和转移过程中扮演重要角色, 通过沉默其表达可抑制MCF-7的侵袭力和迁移力从而抑制其转移.
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短发夹RNA沉默S100A4基因对乳腺癌MCF-7细胞体外增殖和迁移力的抑制
目的 观察靶向S100A4的shRNA对MCF-7细胞增殖和迁移力的影响.方法 构建S100A4基因特异性shRNA表达载体,使用QRT-PCR和Western blot检测转染后MCF-7细胞中S100A4的表达水平,运用MTT法和流式细胞术检测转染后MCF-7细胞增殖水平和凋亡率的变化.将S100A4-shRNA表达载体转染入MCF-7细胞,G418筛选及克隆化培养,并运用划痕实验检测其迁移力的变化.结果 经测序鉴定证实成功构建S100A4-shRNA表达载体.转染48h后,所构建的S100A4-shRNA表达载体能够有效抑制MCF-7细胞中S100A4的表达,并且可以显著降低MCF-7细胞增殖水平以及诱导细胞进入晚期凋亡;稳定转染S100A4-shRNA表达载体的MCF-7细胞形态无显著变化,但是迁移力明显下降.结论 S100A4-shRNA表达载体能有效地抑制乳腺癌MCF-7细胞中S100A4的表达,从而降低细胞增殖水平和迁移力.
