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猪肝细胞型生物人工肝治疗后猪逆转录病毒感染人体的追踪观察
目的追踪观察患者经猪肝细胞型生物人工肝(简称"生物人工肝")治疗后有无逆转录病毒(PERVs)的感染. 方法取中国实验用小型猪,采用2部灌流法制备猪肝细胞,置生物反应器构成生物人工肝.3例重型肝炎肝功能衰竭患者先经单纯血浆置换,接着予以生物型人工肝治疗8～12 h[循环猪肝细胞数(2～3)×1010].留取猪肌肉组织、肝脏组织及治疗前、治疗后即刻、治疗后14和30 d患者血浆标本,分别测定PERVs逆转录酶活性.结果猪的肌肉组织、肝脏组织和猪肝细胞培养悬浮液中逆转录酶活性分别为2.343、2.04和2.499 U/ml,明显高于正常对照组(1.440～1.560 U/ml,P<0.01).患者治疗前逆转录酶活性为1.366～1.654 U/ml,治疗后即刻、治疗后14和30 d为1.440～1.612 U/ml,与治疗前和正常对照组比较,差异均无显著性(P>0.05).结论中国实验用小型猪的肌肉组织、肝脏组织和猪肝细胞培养悬浮液中均存在PERVs,并有该病毒复制.患者治疗后1个月内均无PERVs感染.应及早建立完善的监测PERVs系统,筛选供体、监测受体,以保证猪肝细胞来源的生物人工肝和异种移植临床应用的生物安全性.
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应用PCR和RT-PCR检测猪内源性逆转录病毒及其意义
目的观察猪内源性逆转录病毒(Porcine endogenous retrovirus,PERV)在中国实验小型猪的感染情况.方法针对PREV gag区的序列,选用特异性引物,采用PCR方法检测猪肝脏、皮肤前病毒序列;以及RT-PCR方法检测血清中PERV-RNA序列.结果该法在猪肝脏组织中可检测出PERV前病毒序列;此外,在猪血清标本亦检测出病毒序列,而其它2份HBV、HCV阳性血清及2份其它动物血清(大鼠、兔)检测结果均为阴性,说明该方法特异性较高.结论中国实验小型猪均携带该病毒,并可以释放到血清中;采用该法具有特异、简便的特点,为进一步研究PERV感染及生物安全性奠定了基础.
