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抗异质性胞核核糖核蛋白A2/RA33抗体酶联免疫吸附法的建立及临床应用
目的探讨酶联免疫吸附法(ELISA)检测抗异质性胞核核糖核蛋白A2(hnRNP A2)/类风湿关节炎(RA)33抗体在不同风湿性疾病患者中的阳性率及对RA早期诊断的意义.方法以纯化的重组蛋白hnRNP A2为抗原,用ELISA检测RA 179例、系统性红斑狼疮(SLE) 141例、其他弥漫性结缔组织病(CTD)97例、血清阴性脊柱关节病(SPA)30例、骨关节炎(OA)10例、关节痛/关节炎59例、正常对照40名,比较抗hnRNP A2/RA33抗体在各组人群中的阳性率,并评价其与RA患者临床和实验室检查指标间的关系及早期诊断的价值.结果抗hnRNP A2/RA33抗体在RA患者中的敏感性为36.9%、特异性为87.1%,在SLE、其他CTD、SPA和OA患者中阳性率分别为19.2%、7.2%、6.8%和0.抗hnRNP A2/RA33抗体在早期RA患者中的阳性率为43.3%.结论以纯化的重组蛋白hnRNP A2为抗原的ELISA是检测抗hnRNP A2/RA33抗体,早期诊断RA的可靠方法.
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端粒酶与大肠癌
自1989年Morin[1 ]首次在人的癌细胞中发现端粒酶以来,肿瘤细胞永生化的"端粒-端粒酶"假说已为越来越多的研究结果所证实.同时,在研究过程中,人们发现大肠癌的发生发展、诊断和治疗等各环节都与端粒酶有关.
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端粒酶研究概况
正常细胞经过有限次数的分裂即进入衰老阶段，停止增殖而终衰亡.但肿瘤细胞似乎成功地摆脱了这种衰老的束缚，表现出无限制加速增殖的永生化能力.这使人们意识到衰老与肿瘤这两大生命科学中的难题之间可能存在着某种联系和转换的必然环节.近年来端粒酶(telomerase)的发现和“端粒假说(tdomere hypothesis)”的提出，使有关衰老和肿瘤的研究有了长足的进展.包括Science和Cell等在内的国际著名期刊，正以逐年增加刊登论著、述评、视点文章的形式，对端粒-端粒酶这一研究方向作出了肯定，认为有可能对衰老、肿瘤等重大生物学问题的解决产生深远的影响[1-4].然而时至今日，尽管国内外有关端粒-端粒酶的研究较多，却依然存在着许多问题，相对于实际应用尚存在着距离.因此，正确理解和分析端粒-端粒酶研究的现状并找出深入研究的突破口是非常有必要的.
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大鼠急性肺栓塞后hnRNP-H2和FAH的表达变化及其促细胞凋亡的机制研究
目的 研究大鼠急性肺栓塞模型肺组织中异质性核糖核蛋白H2(hnRNP-H2)和延胡索酰乙酰乙酸水解酶(FAH)的表达变化及其促细胞凋亡的机制.方法 建立大鼠急性肺栓塞模型,分别在急性肺栓塞后1、8、24、48h开胸取肺组织.常规提取肺组织的总RNA和总蛋白,以正常组为对照,半定量RT-PCR法测定hnRNP-H2和FAH mRNA表达水平的变化;Western-blot法测定hnRNP-H2和FAH蛋白表达水平的变化.半定量RT-PCR和Western-blot法测定Bcl-x mRNA的不同剪接体Bel-xs和Bcl-XL在肺栓塞前后的表达变化;Western-blot法测定细胞周期相关蛋白MPM-2和凋亡相关蛋白eytoehrome C和easpase-3的表达变化.TUNEL法观察急性肺栓塞后组织细胞的凋亡情况.结果 在大鼠急性肺栓塞后,hnRNP-H2的mRNA水平和蛋白水平均逐渐升高,在24h和48h升高为明显.大鼠急性肺栓塞后Bcl-xs的表达逐渐升高,而Bcl-xL的表达逐渐下降,导致Bcl-xs/Bcl-XL的比例逐渐升高.FAH的mRNA水平和蛋白水平均逐渐下降,在24h和48h下降为明显.MPM-2,cytochrome c和caspase-3的表达在急性肺栓塞后24h和48h都有明显升高.TUNEL染色发现肺组织内出现明显的细胞凋亡现象.结论 大鼠急性肺栓塞后肺组织内hnRNP-H2的表达明显升高,可能导致Bcl-xs/Bel-xL的比例升高;FAH的表达明显下降,可能导致急性肺栓塞后肺组织细胞周期阻滞于G2/M期,二者共同促进了肺组织细胞的凋亡.
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纤维支气管镜抽吸物中检测HnRNP A2/B1在肺癌诊断中的价值
目的:研究纤维支气管镜(简称纤支镜)抽吸物中异质性细胞核核糖蛋白A2/B1(HnRNP A2/B1)的表达与肺癌的相关性及其用于肺癌诊断的可行性.方法:利用免疫细胞化学的方法检测经病理学或(和)细胞学确诊的肺癌患者和非肺癌患者的纤支镜抽吸物中HnRNP A2/B1的表达情况,并分析其表达水平的差异性.结果:1) HnRNP A2/B1在肺癌组和非肺癌组患者纤支镜抽吸物中表达阳性率分别为68.6%(83/121)和13.6%(3/22),两组比较差异有统计学意义,P<0.05.2) HnRNP A2/B1在不同病理类型中表达阳性率也不同,鳞癌为67.6%(50/74),腺癌为60.0%(18/30),小细胞癌为88.2%(15/17),差异有统计学意义,P<0.05.结论: HnRNP A2/B1在肺癌患者纤支镜抽吸物中表达的敏感性为68.6%(83/121),特异性为86.4%(19/22),可用于肺癌的诊断.
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伴发脑膜炎且血清免疫异常的坏死性淋巴结炎一例临床特点及文献回顾
目的 探讨坏死性淋巴结炎(又称Kikuchi-Fujimoto病,KD)伴发脑膜炎患者的临床特点.方法 总结国内1例以脑膜炎为首发症状且免疫异常的KD患者的临床资料和诊疗经过,同时系统性回顾了国内外所报道的伴有脑膜炎的KD患者19例(包括本例),分析其性别、年龄、免疫指标、临床表现、病毒感染及治疗情况.结果 本例病例为25岁女性患者,伴有血抗核抗体、抗核糖核蛋白阳性,予激素治疗后治愈且未复发.分析全部19例病例,平均年龄为20.2岁,性别(男∶女)比为9:10,7例患者血清免疫异常,7例以脑膜炎为首发症状,5例用激素治疗.结论 伴发脑膜炎的KD发病年龄较普通KD更早,男女比例接近,淋巴结活体组织检查是目前确诊该病的惟一方法.
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hnRNP A1的增强型绿色荧光标记及细胞应激定位分析
目的：构建包含有核不均一核糖核蛋白（hnRNP）A1蛋白编码区序列的真核表达质粒pEGFP-C1-hnRNP A1，并对增强型绿色荧光蛋白（EGFP）标记的hnRNP A1蛋白进行细胞应激共定位分析。方法提取HeLa细胞总RNA，以针对hnRNPA1-3′非翻译区的特异性片段为反转录引物，反转录出包含hnRNP A1编码区序列的cDNA，并以其为模板，降落PCR法扩增出带EcoRⅠ和BamHⅠ双酶切位点的目的基因，利用双酶切法分别酶切目的基因片段和线性pEGFP-C1，在T4-DNA连接酶的催化下将两者连接构建成pEGFP-C1-hnRNP A1重组质粒，然后将重组质粒转染入HeLa细胞内，以激光共聚焦荧光显微镜观察EGFP-hnRNP A1的荧光表达情况，Western印迹法检测EGFP与hnRNP A1的融合表达情况，后进行细胞原位杂交及细胞免疫荧光检测在氧化应激状态下EGFP-hnRNP A1蛋白与poly(A)+mRNA（应激颗粒的标记成分）及DPC1a（加工体的标记蛋白）的应激共定位。结果以单/双酶切及基因测序法鉴定构建的重组质粒无误，激光共聚焦荧光显微镜观察和Western印迹结果检测到绿色荧光融合蛋白的表达；EGFP-hnRNP A1蛋白与poly(A)+mRNA呈现共定位，但与DPC1a无共定位关系。结论重组pEGFP-C1-hnRNP A1质粒成功构建并表达，应激状态下EGFP标记的hnRNP A1参与应激颗粒的构成。
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核不均一核糖核蛋白A1在肿瘤发病机制中作用的研究进展
核不均一核糖核蛋白(hnRNP)家族是近年来研究较热的一组核内RNA结合蛋白,它们在许多方面参与肿瘤的发生、发展,其中hnRNP A1是对肿瘤生物学特性影响较大的hnRNP家族成员之一.目前的研究认为,hnRNP A1主要通过调节RNA表达、促进端粒延长、抑制细胞凋亡、促进细胞增殖等机制参与肿瘤的发生、发展.本文就hnRNP A1在肿瘤发病机制中的研究进展作一概述.
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利用序列特异性DNA亲和层析分离纯化一种前列腺细胞核蛋白
目的:分离纯化RFA结合蛋白并加以鉴定,为进一步深入研究RFA及其结合蛋白相互作用和参与AR介导的PSA基因表达奠定基础.方法:培养人前列腺癌细胞PC-3,提取核蛋白,以RFA序列为探针进行亲和层析分离纯化目的蛋白,层析前后均用电泳迁移率变动分析(EMSA)检测目的蛋白的功能.经SDS-PAGE测定纯化蛋白的分子量,然后切下目的蛋白条带,进行蛋白质鉴定.结果:纯化蛋白在SDS-PAGE图谱上36kD附近呈现单一条带,氨基酸组成分析和质谱分析显示纯化蛋白条带含有2种蛋白,与核内不均一核糖核蛋白A1,A2(hnRHPA1,A2)高度同源.结论:①以Dynal M-280链亲和素磁珠为固相介质的DNA亲和层析,具有简便、快速、无毒的优点,可在对目的蛋白了解甚少的条件下,以较高的纯度将其纯化:②RFA结合蛋白与hnRNP超家族成员hnRNPA1,A2高度同源,其与RFA相互作用的具体机制和意义有待进一步研究.
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锥虫RNA的编辑——尿苷的插入和删除
在锥虫线粒体中存在着一种特殊RNA的编辑系统:尿苷的插入和删除.RNA的编辑需要线粒体DNA和核基因组的共同参与,这一过程是一个新颖的酶促级联反应过程,通过核糖核蛋白(RNP)的组装和去组装完成多个编辑位点的编辑或多个RNA分子的编辑.
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骨不连接区成骨活性的实验研究
目的 检测骨不连骨断端骨形态发生蛋白(BMP)、核心蛋白多糖成分的表达,观察单独应用和联合应用两种因子治疗骨不连的效果.方法 制作兔桡骨肥大型骨不连动物模型,通过大体观察、影像学和组织学检测,比较骨断端组织成分的变化.采用免疫组织化学染色、Real-time PCR、Western-Blot检测骨不连接区组织中BMP、核心蛋白多糖的表达.分别用单纯BMP(A组)、纤维蛋白胶复合BMP和核心蛋白多糖(B组)、单纯核心蛋白多糖(C组)和空白组溶解液(D组)局部注射骨不连接区,通过三维CT观察骨不连接区的成骨情况.结果 组织学检测示骨折愈合侧组织内大量新生骨组织和新生血管形成,骨不连侧组织内主要为纤维瘢痕组织.免疫组织化学检测显示骨折愈合侧可见核心蛋白多糖染色和BMP染色阳性;骨不连接侧无明显核心蛋白多糖表达,BMP-2表达阴性.骨愈合侧和骨不连侧核心蛋白多糖的相对表达量分别为2.402±0.260、1.313±0.187,差异有统计学意义(t=10.193.P=0.000).Westem-Blot检测示骨不连接侧组织BMP-2的表达较骨折愈合侧明显下降(t=69.007,P=0.000).A、B、C、D组局部注射治疗骨不连的成骨量CT值分别为551.40±41.85、674.40±36.55、471.40±27.91、309.20±147.86,差异有统计学意义(F=18.209,P=0.000).结论 骨不连形成后,由于BMP和核心蛋白多糖成分的减少,局部组织的抗纤维化能力和成骨能力下降,联合应用外源性BMP和核心蛋白多糖能促进骨不连接区陈旧性组织成骨.
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沉默hnRNP A2/B1抑制人宫颈癌Hela细胞中cyclin D1/E表达的研究
目的 探讨沉默核内不均一核糖核蛋白A2/B1(hnRNP A2/B1)基因后对人宫颈癌Hela细胞中细胞周期蛋白(cyclin) D1及cyclin E的表达及裸鼠移植瘤生长的影响.方法 运用慢病毒转染沉默Hela细胞中的hnRNP A2/B1基因并用成功沉默后的细胞建立体外细胞及体内移植瘤模型.用Western blot检测细胞及移植瘤中的cyclin D1/E的表达情况,四甲基偶氮唑蓝(MTT)检测细胞的增殖能力,免疫组织化学分析各组移植瘤组织中增殖相关蛋白增殖细胞抗原(PCNA)及Ki-67的表达水平并用HE染色分析组织的病理形态.结果 沉默hnRNP A2/B1基因后Hela细胞中cyclin D1/E表达降低,裸鼠移植瘤PCNA及Ki-67相较未沉默组表达降低,裸鼠移植瘤的生长明显受到抑制,差异均有统计学意义(P＜0.05).结论 沉默hnRNP A2/B1基因后能降低宫颈癌Hela细胞中cyclin D1及cyclin E的表达,抑制肿瘤细胞增殖及生长.
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肺泡灌洗液中HnRNP A2/B1和P53蛋白对肺癌诊断价值的探讨
0 引言研究[1]表明,核内不均一核糖核蛋白(heterogenous nuclear ribnucleoprotein,HnRNP)A2/B1,P53蛋白,在早期肺癌和癌前病变中过度表达,比以往的细胞形态学检测有更高的敏感性.我们采用流式细胞术联合检测肺癌患者支气管肺泡灌洗液(BALF)中脱落细胞的HnRNP A2/B1和P53蛋白水平,以探讨联合检测在肺癌诊断中的应用价值.
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SNRPN基因rs220030位点的分型及甲基化亲缘相关性
目的 建立变性梯度凝胶电泳(denaturing gradient gel electrophoresis,DGGE)技术与焦磷酸测序技术对小核核糖核蛋白多肽N(small nuclear ribonucleoprotein polypeptide N,SNRPN)基因rs220030位点的分型方法.建立应用焦磷酸测序技术分析CpG甲基化状态的方法,探讨rs220030位点用于亲缘等位基因判定的可行性. 方法 应用DGGE技术对97例上海地区汉族家系血样rs220030位点进行分型,同时应用焦磷酸测序技术对其中25例血液来源的家系样本的rs220030位点分型,并对两种方法在SNP分型结果上进行比较.通过重亚硫酸盐修饰联合焦磷酸测序技术分析随机2组家系样本rs220030位点上游CpG甲基化状态,判断甲基化是否有亲缘相关性. 结果 经DGGE检测97例家系血样rs220030位点分型结果为C纯合子20例,T纯合子29例,C/T杂合子48例.经焦磷酸测序检测25例血液来源的家系样本结果与DGGE检测结果一致.经重亚硫酸盐修饰联合焦磷酸测序技术分析,2组血液来源的家系子代的rs220030位点上游CpG甲基化状态均与母亲较相似.结论 相比DGGE技术,焦磷酸测序技术更精确、方便,适合大样本、高通量SNP分型.重亚硫酸盐修饰联合焦磷酸测序技术可以精确分析CpG甲基化状态.rs220030位点可用于亲缘等位基因判定.
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抗SmDl抗体在诊断系统性红斑狼疮中的意义
目的 探讨血清抗SmDl抗体检测对诊断系统性红斑狼疮(SLE)的意义.方法 分别检测95例SLE组患者、106例病例对照组患者及72例健康组血清中的自身抗体,其中抗核抗体(ANA)和抗SmDl抗体的检测用ELISA法,抗Sm抗体、抗双链DNA(dsDNA)抗体、抗核小体抗体(ANuA)的检测用免疫印迹法.结果 SLE组患者血清中抗SmDl抗体阳性率为75.8%,抗Sm抗体的阳性率为28.4%,两者阳性率差异有统计学意义(P<0.01),结论抗SmDl抗体的特异性较高,敏感度也高于抗Sm抗体,可以作为诊断SLE的一项参考指标,特异性抗体的联合检测可以提高SLE诊断的敏感度.
