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Sm D1抗原文献资料
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人Smith D1抗原在原核细胞中的表达与纯化及临床应用
目的 获得人Smith D1(Sm D1)抗原基因,并进行原核表达及建立斑点免疫金渗虑(dot immunogold filtration assay,DIGFA)检测方法.方法 采用基因工程技术,通过PCR从人白血病HL-60细胞cDNA文库中扩增人Sm Dl抗原基因,构建pGEX-5T-Sm D1重组表达载体,在大肠杆菌BL21中通过异丙基硫代半乳糖苷酶(IPTG)诱导表达Sm D1蛋白.利用初步纯化的Sm D1抗原建立DIGFA.结果 重组质粒测序和酶切结果显示Sm D1抗原基因正确插入pGEX-5T,重组蛋白、复性及纯化产物经12%十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE),在相对分子质量为39 000处有一明显的蛋白表达条带,免疫印迹法分析表明,重组蛋白具有人Sm D1抗原的抗原性.DIGFA与色疫印迹法检测结果的差异无统计学意义(P＞0.05),二者的符合率为91.7%.DIGFA敏感度为100%,特异度为83.3%结论通过基因工程技术制备获得初步纯化的谷胱苷肽转移酶(GST)-Sm D1融合蛋白,用该抗原建立的DIGFA与免疫印迹法相似,且具有快速、简便和可靠等优点.
