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微阵列比较基因组杂交技术及其在遗传性疾病中的应用
拷贝数变化(copy number alterations,CNVs)是指患者与健康对照之间基因组DNA拷贝数的差异,以及导致微缺失或微复制综合征的基因组不平衡,如缺失、重复、扩增和非整倍体等.基因组CNVs通过基因缺失(或)重复、基因断裂、位置效应、后生效应或上位效应等方式可导致各种人类疾病或功能障碍.近研究发现,CNVs是许多遗传病的细胞遗传基础,根据特征性的CNVs,可对遗传病进行准确诊断.
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遗传咨询中的染色体倒位
染色体倒位属于染色体结构畸变的一种,系指染色体发生两次断裂的片段倒转180度后重新接合,虽然没有遗传物质的丢失,但其基因顺序发生颠倒,故称倒位.倒位的染色体仅涉及它自身的染色体,是染色体平衡重排的常见类型.其实质是遗传物质或遗传信息的增减,可以产生遗传学剂量效应和位置效应,不同程度地影响发育和生殖.我室自1981年8月～1998年12月间对2 672例病人进行了外周血染色体检查,检出染色体倒位携带者48例,检出率为1.79%.
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RNA干扰技术及其临床应用与进展
基因沉默是广泛存在于生物界的古老现象,是生物体抵御病毒或其它外来核酸入侵以及保持自身遗传稳定的保护性机制,广泛存在于真核生物细胞中.通常基因沉默发生在两种水平上:①由于DNA甲基化、异染色质化以及位置效应引起转录水平上的基因沉默(Transcriptional gene silencing,TGS);2在基因转录后水平上通过对目的RNA特异性降解而使基因失活的转录后基因沉默(Post transcriptional gene silencing,PTGS).RNA干扰 (RNA interference,RNAi)即属于转录后水平的基因沉默.随着近年来对RNA干扰机制和功能的深入研究,RNA干扰技术在人类多种疾病的治疗方面显示出了良好的应用前景.本文就RNA干扰技术及其临床应用现状和进展做一综述.
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siRNAs表达载体沉默RAB5A基因的位置效应研究
目的 研究小干扰RNA(siRNAs)表达载体沉默RAB5A基因的位置效应,寻找沉默RAB5A基因的佳作用靶点.方法 利用MFold软件分析RAB5A mRNA的二级结构,构建针对RAB5A mRNA不同位点的siRNAs表达载体,转染Anip973细胞后,通过RT-PCR和Western-blot方法评价siRNAs对RAB5A基因表达的抑制作用.结果 针对RAB5A mRNA编码区内可及位点设计的siRNAs分别抑制72%和85%的RAB5A基因表达,而针对不可及位点设计的siRNAs则完全没有活性;非编码区内也存在沉默RAB5A基因的siRNAs有效作用靶点;siRNAs分子与RAB5A mRNA靶序列之间引入2个错配碱基时,siRNAs的抑制活性完全丧失.结论 MFold软件分析的RAB5A mRNA二级结构可以作为分析和寻找可及位点的依据,siRNAs的作用效率与RAB5A mRNA靶位点的可及性密切相关.
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富含GC的DNA片段对中国仓鼠卵巢细胞中转基因表达的影响及其位置效应
目的 分析富含GC的DNA片段对中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中转基因表达水平的影响及其位置效应.方法 人工合成富含GC的DNA片段,将其克隆到表达载体的表达盒的5'、3'端及两端,构建在载体不同位置插入富含GC DNA片段的3个新表达载体(pIRES-G1、pIRES-G2和pIRES-G3),分别转染CHO细胞并用荧光显微镜进行观察;对照载体为pIRES-EGFP.采用G418筛选稳定细胞株,流式细胞术分析增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)检测其转基因拷贝数.结果 成功构建了在载体不同位置含有GC DNA片段的3个载体,瞬时及稳定转染结果显示,在载体表达盒两端及3'端插入富含GC DNA片段能够明显提高EGFP在CHO细胞中的表达水平.与对照载体比较,稳定表达情况下载体表达盒两端及3'端插入富含GC DNA能分别提高转基因表达水平约1.39、1.32倍,而在5'端插入富含GC DNA片断对于提高基因表达水平作用尚不明显.表达盒两端及3'端插入富含GC DNA片段的转基因拷贝数比对照载体提高了约1.32、1.24倍.结论 富含GC的DNA片段在CHO细胞提高转基因表达与其在载体上的位置有关,在载体表达盒两端或3'端插入一段富含GC的DNA片段可以提高转基因表达水平.
关键词： 富含GC的DNA片段 转基因 位置效应 -
短柄乌头花序内花的分配与种子产生的研究
目的 为了系统地了解高寒地区植物短柄乌头Aconitum brachypodum Diels自然种群的繁殖对策.方法 在其繁殖分配研究的基础上,通过统计花的多种结构特征、总状花序内的性分配模式的研究.结果 发现同其它顶向式(从花序基部到顶部)开花的植物一样,顶部花表现出偏雄的性分配,随着花从基部到顶部的发育次序,短柄乌头的雌蕊重、心皮数、种子数和种子重/果实减少;而花药数,花粉数/胚珠数以及雄蕊重/雌蕊重增大.结籽率在不同的位置间没有显著差异,不受花粉数量的限制;去花实验没有增加剩余部位花的种子数,只是增加了种子大小,这是花序内不可避免的的资源分配存在着位置依赖性的原因.结论 了解短柄乌头自然种群的繁殖对策,为短柄乌头的濒危和保护提供理论依据.
