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胃癌患者术前腹腔冲洗液游离DNA中TIMP-3基因甲基化与腹腔微转移的相关性
目的:探讨胃癌患者术前腹腔冲洗液中组织金属蛋白酶抑制因子-3(tissue inhibitor of metalioproteinase 3,TIMP-3)基因启动子CpG岛异常甲基化与腹腔微转移的相关性.方法:应用甲基化特异性实时荧光聚合酶链反应技术检测92例胃癌患者术前腹腔冲洗液中TIMP-3基因启动子CpG岛甲基化状态,分析TIMP-3基因异常甲基化与患者临床病理参数及预后之间的关系.结果:在92例胃癌患者术前腹腔冲洗液标本中,有49(53.26％)例检测到了TIMP-3基因甲基化,且TIMP-3基因甲基化与肿瘤大小(P=0.013)、静脉侵犯(P=0.030)和远处转移(P=0.013)间均存在相关性,与生长方式、分化程度、淋巴管侵犯、淋巴结转移、浸润深度和临床分期间存在显著相关性(P=0.000),而与性别、年龄、Helicobacter pylori感染状况以及肿瘤部位等不存在相关性(P分别为0.833、0.236、0.300、0.236).生存分析发现TIMP-3基因非甲基化患者具有独立的生存优势(P=0.000).结论:胃癌患者术前腹腔冲洗液游离DNA中TIMP-3基因异常甲基化可反映腹腔微转移发生,并提示预后不良.
关键词： 胃癌 组织金属蛋白酶抑制因子-3 甲基化 腹腔微转移 预后 -
腺病毒载体搭载的TIMP-3基因对兔椎间盘基质的调节作用
[目的]考察腺病毒载体搭载的重组人组织金属蛋白酶抑制因子-3基因(RAdTIMP-3)转染兔椎间盘后对椎间盘内主要基质成分质量的影响,并探讨其用于椎间盘退变治疗的可行性.[方法]扩增Lac-Z基因标记的RAdTIMP-3和重组腺病毒载体RAd66,并进行纯化、鉴定及滴度测定.将30只日本大白兔随机分入5组,分别向L4、5、L5、6椎间盘内注射生理盐水(第1组)、1.0×1010OPU/mlRAd66(第2组)以及1.0×1010OPU/mlRAdTIMP-3(第3、4、5组)各25 μl.各组分别于注射后2、2、1、2、4周收集标本,X-gal染色检测转染效率,RT-PCR检测TIMP-3及聚集蛋白聚糖核心蛋白的表达,TIMP-3及H型胶原免疫组化染色、藏红O-快绿染色及Tunel染色考察转染对椎间盘基质的调控作用.[结果](1)RAdTIMP-3经扩增和纯化后浓度可达1.9×10TM OPU/ml.(2)RT-PCR显示,3、4、5组TIMP-3基因表达均较1、2组明显增加,3、4、5组核心蛋白基因表达较1、2组略有增强.(3)Tunel染色显示各组凋亡细胞比例无明显差异.(4)第5组藏红O-快绿染色及II型胶原免疫组化染色染色强度均好于1、2组.[结论]RAdTIMP-3能够广泛而安全地在兔椎间盘内表达,并改善椎间盘基质成分的质和量,具备用于椎间盘退变治疗的潜力.
关键词： 组织金属蛋白酶抑制因子-3 椎间盘 聚集蛋白聚糖 Ⅱ型胶原 -
TIMP-3N端结构域重组腺病毒载体的构建与鉴定
目的 构建N-TIMP3重组腺病毒载体,为深入研究组织金属蛋白酶抑制因子-3(tissue inhibitor of metalloproteinases-3,TIMP-3)N端结构域对胰腺癌的作用奠定基础.方法 PCR扩增编码人TIMP3信号肽及其N端结构域的DNA序列,定向克隆至空载穿梭质粒pShuttle-CMV,构建重组穿梭质粒pShuttle-N-TIMP3,并测序鉴定.将重组pShuttle-N-TIMP3转化BJ5183感受态细菌,与其内的腺病毒骨架质粒pAdEasy-1进行同源重组,构建重组腺病毒载体pAd-N-TIMP3,并经酶切与PCR鉴定.将线性化的重组载体转染QBI-293A细胞包装病毒,TCID50法检测病毒滴度,用Western 印迹检测目的 蛋白的表达.结果 重组腺病毒载体pAd-N-TIMP3经鉴定正确,病毒滴度为5×108 PFU/ml,并检测到目的 蛋白的表达.结论 成功构建了重组腺病毒载体pAd-N-TIMP3.
关键词： 组织金属蛋白酶抑制因子-3 N端结构域 腺病毒载体
