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利用质谱技术对肝癌组织中自然呈递的MAGE表位进行鉴定
目的:利用质谱检测技术和差异比较方法,对肝癌组织中自然呈递的黑色素瘤抗原基因(melanoma antigen gene,MAGE)表位进行鉴定分析.方法:肝癌细胞和癌旁无瘤肝细胞取自同1例肝癌患者,弱酸洗涤法分离肝癌细胞和肝细胞表面所有肽段;利用表位预测法挑选出HLA-A2限制的MAGE-1,MAGE-3理论侯选肽作为质谱筛选目标;利用弱酸洗涤法从肝癌细胞和肝细胞表面分离肽段,这些肝癌细胞和肝细胞都来自同1例肝癌患者.然后用HPLC分离纯化这些肽段,并将二种细胞的各峰段(fractions)进行差异比较,挑选出肿瘤特异性的峰段进行质谱分析.结果:经表位预测,共选出80条目标肽.从肝癌细胞样品中检测出2条自然呈递的MAGE抗原肽:FLWGPRALV(MAGE-3271-279)和FPSLREAAL(MAGE-1294-302),他们分别来自HCC的峰45.246和峰34.801,m/z分别为1 058.49和1 003.62.结论:这是首次从肿瘤组织中分离、鉴定出自然呈递的MAGE抗原表位.本实验证实质谱检测法可以对组织中自然呈递的肿瘤相关抗原表位进行快速准确检测,而检测的准确性和高效性对于表位的鉴定和肿瘤疫苗的设计都是非常重要的.
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利用质谱技术对肝癌组织中自然呈递的MAGE-3表位的鉴定
目的 尝试利用质谱技术对肝癌细胞表面自然呈递的MAGE-3表位进行检测和分析,为恶性肿瘤的免疫治疗提供研发制备瘤苗的新方法.方法 利用表位预测法挑选出HLA-A2限制的MAGE-3理论侯选肽;弱酸洗涤法分离肝癌细胞和癌旁无瘤肝细胞表面所有肽段(肝癌细胞和肝细胞都来自同一名肝癌患者);HPLC进行纯化分离和差异比较;筛选出含有肿瘤特异肽的组分进行串联质谱分析;后检测患者体内是否有针对该表位的T细胞反应.结果 从肝癌细胞样品中检测出自然呈递的MAGE-3<,271-279>表位抗原肽:FLWGPRALV,并从患者外周血中检测出特异性的T细胞反应.结论 本实验首次从肿瘤组织中检测出自然呈递的MAGE-3<,271-279>表位,并初步展示了质谱在肿瘤相关表位检测中快捷、准确的特点,这对于肿瘤相关表位的鉴定和肽疫苗的设计都是非常重要的.
