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PKARⅡβ文献资料
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人pEGFP-PKARⅡβ重组质粒的构建及其在BGC-823胃癌细胞中的表达
目的:研究人的蛋白激酶A调节亚基RⅡβ(PKARⅡβ)基因的绿色荧光蛋白(GFP)真核表达载体融合蛋白在胃癌细胞BGC-823内的表达和定位,初步探讨其在肿瘤细胞中的分子作用机制.方法:以pRSETB-PKARⅡβ质粒为模板,PCR扩增出全长PKARⅡβ编码序列,用Xho Ⅰ和EcoR Ⅰ双酶切后,亚克隆至含有GFP标签的融合表达栽体pEGFP-C1中.测序正确后,将重组质粒转染到胃癌细胞BGC-823中,提取细胞蛋白进行Western bolt检测.利用共聚焦激光扫描显微镜观察pEGFP-PKARⅡβ在人胃癌细胞BGC-823内的定位.结果:将人全长PKARⅡβ编码序列克隆到了真核表达载体pEGFP-C1中,酶切鉴定片段为1.2 kb,在预期的位置产生条带.Western blot检测到了融合蛋白正确表达,分子量约为72 000 Da.并观察到GFP-PKARⅡβ在HEK293和BGC-823细胞内都有表达,且定位以细胞质为主,在细胞核内少量表达.结论:成功构建了人全长PKARⅡβ编码序列的pEGFP-PKARⅡβ真核表达载体,证实GFP-PKARⅡβ蛋白在BGC-823细胞质内特异表达,为进一步研究PKARⅡβ的在胃癌中的功能提供了重要的实验材料.
