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用SEREX方法筛选HCC抗原及hcct-19表达谱的检测
目的:用SEREX方法鉴定HCC表达的肿瘤抗原,检测hcct-19的表达谱.方法:将HCC表达文库铺板,IPTG诱导蛋白质表达,BSA封闭.同1:1 000稀释的预吸收HCC患者血清反应后,与1:5 000稀释的羊抗人抗体反应,在BCIP/NBT的作用下显色,挑取阳性克隆噬菌斑块,重复筛选和铺板3次,直至得到一致的单克隆免疫阳性重组噬菌体.挑取阳性克隆噬菌斑,用载体克隆位点两端的通用引物进行PCR扩增,PCR产物纯化测序,序列结果用BLAST软件同GenBank中的已知基因进行对比分析.检测阳性克隆抗原基因hcct-19在部分正常组织、肿瘤组织及肿瘤细胞株中的表达,半定量RT-PCR方法检测阳性克隆抗原基因在肝癌及癌旁组织中的表达.结果:共得到31个阳性克隆,代表14个不同的cDNA序列,其中10个为已知功能的基因,4个为未知功能的基因.在已知功能的基因中,RFC2、NDUFA4及MCART1首次被发现与HCC有关.hcct-19在部分正常组织、肿瘤组织及肿瘤细胞株中表达,在肝癌组织中的表达强度明显高于癌旁组织(13.2±2.7 vs 2.9±0.3,P＜0.05).结论:本实验筛选出的HCC抗原有助于进一步阐明HCC的形成过程.hcct-19可能作为一个过量表达的基因参与了HCC的发病过程.
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原发性肝癌患者血清hcct-19特异性抗体的研究
目的 探讨hcct-19抗原对HCC的特异性.方法 采用重组Cdna表达文库血清学分析技术(SEREX)研究异体HCC和其他疾病患者血清hcct-19抗体的阳性率,并用X2检验分析HCC患者血清中hcct-19抗体阳性表达与患者临床指标之间的关系.结果 hcct-19抗体的产生主要见于HCC患者,阳性反应率为27/46(58.70%).正常健康人、慢性乙型肝炎患者、乙型肝炎肝硬化患者、胃癌患者、胰腺癌患者及大肠癌患者阳性反应率分别为0.00%(0/20)、0.00%(0/20)、0.05%(1/20)、8.33%(1/12)、0.00%(0/9)及0.00%(0/11).HCC患者血清中hcct-19抗体的表达与患者的年龄、性别、肿瘤大小、肿瘤分化程度、血清AFP水平、HBV感染及是否合并肝硬化无显著的相关性(P>0.05).结论 hcct-19抗原对HCC有高度特异性,可考虑作为HCC血清学诊断的指标之一.
