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全反式视黄酸对人α1(Ⅰ)前胶原启动子活性的作用
目的探讨全反式视黄酸(t -RA)对人α1(Ⅰ)前胶原(COL1A1)启动子的调控作用,以及胰岛素样生长因子1(IGF-1)与胰岛素对这一调控作用的影响.方法构建含人C OL1A1启动子序列2483～+42bp片段与氯霉素乙酰基转移酶(CAT)报告基因的重组体pCOLH2.5.用Fugene转染试剂瞬时转染至人皮肤成纤维细胞,加入t-RA或(和)IGF-1及胰岛素,测定CAT活性.结果 2μmol@L1与10μmol@L-1 t-RA使pCOLH2.5的活性降至对照的79%±7%与29%±6%.IGF-1与胰岛素能促进pCOLH2.5的活性.t-RA能降低IGF-1与胰岛素的这一促进作用.结论 t -RA能下调人COL1A1启动子的活性,而IGF-1与胰岛素能上调该启动子的活性.t -RA能降低IGF-1与胰岛素的这一上调作用.
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滋阴泻火中药合剂对青春期大鼠垂体生长激素和长骨干骺端胰岛素生长因子1基因表达的调节
目的:观察滋阴泻火中药合剂对青春期大鼠垂体生长激素、长骨干骺端胰岛素样生长因子1基因表达的影响,探讨中药对垂体、长骨干骺端促生长机能的调节作用.方法:实验于2002-09/2003-03在上海瑞金医院完成.将青春期SD雌性大白鼠共22只分为对照组和实验组,每组11只.对照组:喂饲生理盐水1个月,5 mL/次,1次/d;实验组:喂饲滋阴泻火中药合剂(由生地12 g,炙龟板12 g,黄柏9 g,知母9 g等组成;均由上海复旦大学附属儿科医院中药制剂室煎制成浓缩合剂,每毫升约含生药3 g.)1个月,5 mL/次,1次/d.疗程结束后,动物处死,取出垂体及左后肢骨干骺端,提取总mRNA.采用实时荧光RT-PCR定量检测技术,检测垂体生长激素mRNA,长骨干骺端胰岛素样生长因子1 mRNA表达水平.实时荧光RT-PCR定量检测方法:①垂体、长骨干骺端总RNA提取采用一步法.并逆转录合成cDNA,PCR扩增产物经15 g/L琼脂糖电泳后,纯化,制备标准曲线,并扩增.②垂体生长激素扩增条件:先94℃2 min,然后94℃变性10 s,58℃退火30 s,72℃延长20 s,3个步骤作为1个循环,共扩增40个循环.长骨干骺端胰岛素样生长因子1扩增条件:先94℃3 min,然后94℃变性10 s,60℃退火20 s,72℃延长20 s,3个步骤作为1个循环,共扩增40个循环.经过t检验处理,比较两组间垂体生长激素及长骨干骺端胰岛素样生长因子1基因表达水平的变化,观察滋阴泻火中药合剂对上述指标基因表达的影响.结果:实验动物22只,生理盐水和中药灌胃时误灌入气管窒息而死,各1只,进入结果分析20只.①实验组生长激素cDNA的复制数明显低于对照组[(7.08±1.20)×107,(19.38±6.69)×107;t=5.728,P＜0.05],且扩增片段为1条长度为533 bp的条带,未见其他非特异性条带.②实验组干骺端胰岛素样生长因子1 cDNA复制数明显低于对照组[(2.28±0.65×102),(21.41±5.85×102);t=10.268,P＜0.05];电泳图显示干骺端胰岛素样生长因子1 cDNA扩增片段为一条长度为202 bp的条带,未见其他非特异性条带.结论:滋阴泻火中药合剂可在转录水平调节腺垂体生长激素及长骨干骺端软骨细胞胰岛素样生长因子1的基因表达,从而调整生长激素-胰岛素样生长因子1轴的功能活动.
