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HCVNS3蛋白对正常人源肝细胞生长及MAPK磷酸化的影响
目的:研究丙型肝炎病毒非结构区3(HCV NS3)蛋白对正常人源肝细胞的转化及MAPK磷酸化调节的作用.方法:利用脂质体介导转染技术和G418筛选得到稳定表达NS3蛋白的正常人源性肝细胞QSG7701,PCR和免疫组化S-P法检测细胞中NS3的表达;细胞记数和软琼脂实验鉴定其生物学性质;抗磷酸化MAPK抗体和抗MAPK抗体Westem blot检测转染细胞MAPK活性及表达.结果:HCV NS3转染的QSG7701肝细胞,其NS3蛋白过度表达于细胞质;真核表达质粒pRcHCNS3-5'转染细胞倍增时间为12 h,较pRcHCNS3-3'、pRcCMV转染细胞和未转染的QSG7701明显缩短(分别24 h,26 h和28 h).pRcHCNS3-5'、pRcHCNS3-3'和pRcCMV转染细胞及正常肝细胞在软琼脂中的克隆形成率分别为33%、1.33%、1.46%、1.11%,pRcHCNS3-5'形成的克隆明显高于其他三种细胞(P＜0.01).pRcHCNS3-5'转染细胞MAPK磷酸化程度明显高于其他三种细胞(分别为8 858±877,5 612±656,2 212±245和989±188).(P＜0.01),而MAPK的表达量没有差异(P＞0.05).结论:人源性正常肝细胞QSG7701是研究HCV NS3蛋白致病机制的较好的细胞系;HCV NS3蛋白N端多肽具有促进细胞增生和改变细胞表型的作用;HCV NS3蛋白N端多肽能上调MAPK活性,不影响MAPK的表达量.
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永生化髁突软骨细胞克隆形成能力和致瘤性的检测
目的研究永生化髁突软骨细胞(IMCC)的致瘤性和克隆形成能力等转化特征.方法将IMCC和原代培养的髁突软骨细胞(MCC)按一定密度接种于软琼脂培养基中,观察2周后克隆形态及并计算克隆形成率.两种细胞接种于BalB/c nu-/nu-裸鼠背部皮下,术后3天、1月和3月肉眼观察的同时,局部取材,进行HE染色.结果 MCC不能在软琼脂中形成克隆,而IMCC可形成2种形态的克隆,克隆形成率为4.5%.IMCC接种后3天接种部位有细胞聚集的团块,而1月和3月时接种区组织结构与未接种部位无明显区别.结论 IMCC增殖能力强,在裸鼠体内不致瘤,属于一般转化细胞.可尝试将其作为种子细胞用于软骨组织工种中材料毒性实验等方面的研究.
