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AGS细胞系中12-LOX的表达及其抑制剂对细胞增殖的影响
目的:探讨人胃癌细胞系AGS中12-脂肪氧化酶(12-lipoxygenase,12-LOX)的表达情况及其抑制剂黄芩甙元(baicalein)对AGS细胞增殖的影响.方法:AGS在含100mL/L小牛血清+100kU/L青、链霉素的RPMI1640培养基中常规培养.用RT-pCR检测12-LOX在AGS中的表达情况,分别以20,40,80 μmol/L baicalein干预细胞,用四氮唑蓝(thiazolyl blue tetrazolium bromide,MTT)法在24,48,72 h测量细胞吸光度,检测baicalein对细胞增殖的影响;用倒置显微镜和电子显微镜进行形态观察;通过脱氧核糖核酸末端转移酶介导的dUTP缺口末端标记法(TUNEL)和吖啶橙-溴化乙锭(AO-EB)染色法检测细胞凋亡指数.结果:AGS细胞中存在12-LOXmRNA表达;MTT显示baicalein大致呈时间、剂量依赖性抑制细胞增殖(各组间P＜0.01,除外40 μmol/L 24 h组与48 h组);AGS细胞存活率高为82.1%,低为38.4%.倒置显微镜下可见baicalein干预后的细胞皱缩,部分细胞胞体变圆,脱离贴壁状态,成为悬浮细胞;电镜下可见baicalein干预后的细胞出现了凋亡的特征性改变:核染色质边集及凋亡小体形成:AO-EB染色法显示除0 μmol/L组不同时间点细胞凋亡指数无显著差异外(P＞0.05),其余各干预组细胞凋亡指数均有显著差异(P＜0.01);TUNEL染色法显示48 h时,baicalein 80 μmol/L细胞调亡指数为38.37±0.36%而0 μmol/L组细胞调亡指数为7.27±0.21%,两组间存在显著差异(P＜0.01).结论:人胃癌细胞AGS中存在12-LOXmRNA表达,其特异性抑制剂baicalein能抑制AGS细胞增殖并促进其凋亡.
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12-脂肪氧化酶抑制剂诱导人肝癌细胞凋亡及其对survivin基因表达的影响
目的:探讨12-脂肪氧化酶(12-LOX)抑制剂诱导人肝癌细胞凋亡的作用及其对survivin基因表达的影响.方法:对人肝癌细胞株HepG2进行细胞培养,取指数生长期细胞设对照组、12-LOX抑制剂组(baicalein 20、40和80μmol·L-1组),加试剂后继续培养72 h.透射电镜观察抑制剂组和对照组细胞形态.RT-PCR法分别检测实验组和对照组肝癌细胞12-LOX mRNA的表达情况.MTT法检测细胞增殖情况.DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡.RT-PCR法检测survivin mRNA的表达.结果:人肝癌细胞株HepG2中存在12-LOX mRNA的明显表达,baicalein干预后,12-LOXmRNA表达量明显减弱.透射电镜下发现,对照组细胞胞核和细胞器亚微结构清晰,核膜完整;而经baicalein处理后,凋亡细胞增多,而且同一电镜切片中可以观察到不同时期的凋亡形态学改变,并可见坏死细胞及细胞碎片.MTT显示大致呈时间-剂量依赖性抑制细胞增殖,细胞存活率随着baicalein给药后时间的延长和给药浓度的增加而逐渐下降(P＜0.05);baicalein干预后HepG2细胞提取DNA进行琼脂糖凝胶电泳,可见梯形条带,而对照组未出现梯形条带.12-LOX抑制剂baicalein可降低HepG2细胞中survivin表达,并呈浓度-时间依赖性.结论:12-LOX抑制剂能诱导人肝癌细胞HepG2的细胞凋亡,其诱导细胞凋亡的机制可能与下调抗凋亡基因survivin的表达有关.
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12-脂肪氧化酶与肿瘤
12-脂肪氧化酶(12-Lipoxygenase/12-LOX)是花生四烯酸(arachidonic acid/AA)和其他不饱和脂肪酸(Un-saturated fatty acid)代谢的关键酶,它能介导一分子氧进入底物并在碳十二的位置产生羟基形成具有生物活性的代谢产物:12-羟基廿碳四烯酸(12-Hydroxyeicosatetraenoic acid/12-HETE),从而影响细胞的信号转导,结构和代谢.由于构型不同,12-LOX可分为12RLOX和12S-LOX,其中12S-LOX至少存在三种亚型,即:血小板型、白细胞型和表皮型12S-LOX.众多研究显示,12S-LOX,尤其是血小板型12S-LOX(p12-LOX)及其代谢产物12S-HETE与肿瘤的发生、发展和转移密切相关.
关键词： 12-脂肪氧化酶 肿瘤 12-羟基廿碳四烯酸
